[发明专利]荧光探针及其应用在审
申请号: | 202211547353.4 | 申请日: | 2022-12-05 |
公开(公告)号: | CN115894635A | 公开(公告)日: | 2023-04-04 |
发明(设计)人: | 吴长锋;李媛;房晓峰 | 申请(专利权)人: | 南方科技大学 |
主分类号: | C07K14/00 | 分类号: | C07K14/00;C07K1/107;G01N33/68;G01N33/58;C09K17/14;G01N21/64 |
代理公司: | 华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 吴燕琳 |
地址: | 518055 广东省深*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 荧光 探针 及其 应用 | ||
1.荧光探针,其特征在于,包括多肽、荧光供体以及荧光受体,所述荧光供体和所述荧光受体带有相反电荷,所述荧光供体和所述荧光受体分别连接于所述多肽的两端并被所述多肽隔开,所述多肽包括可被目标蛋白切割的肽段;当所述多肽被目标蛋白切割后,带有相反电荷的所述荧光供体和所述荧光受体之间的距离减小,使得所述荧光供体和所述荧光受体之间荧光共振能量转移增加。
2.根据权利要求1所述的荧光探针,其特征在于,所述荧光探针满足以下特征中的至少一个:
(1)所述目标蛋白包括ATG4B蛋白、Caspase-3蛋白以及MMP-2蛋白中的至少一种;
(2)所述荧光探针中荧光供体为带负电的半导体聚合物点;
(3)所述荧光探针中荧光受体为带正电的有机荧光染料;
(4)所述荧光探针中荧光供体连接于所述多肽的C端,荧光受体连接于所述多肽的N端;
(5)所述多肽包括调节肽段,所述调节肽段的两端分别连接所述荧光供体和所述可被目标蛋白切割的肽段;
(6)所述荧光探针的平均直径为5nm~50nm;
(7)所述荧光探针中的多肽被目标蛋白切割后,所述荧光供体和所述荧光受体之间的距离小于10nm。
3.根据权利要求2所述的荧光探针,其特征在于,所述半导体聚合物点选自PFBT聚合物点、PFPV聚合物点、PDHF聚合物点、PPE聚合物点、MEH-PPV聚合物点以及PFO聚合物点中的至少一种;和/或
所述有机荧光染料选自罗丹明染料和花青染料中的至少一种;
优选的,罗丹明染料包括罗丹明B染料;
优选的,花青染料包括Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和Cy7.5中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的荧光探针,其特征在于,所述荧光供体通过链霉亲和素-生物素亲和偶联所述多肽;和/或
所述调节肽段为多聚脯氨酸。
5.根据权利要求4所述的荧光探针,其特征在于,所述多聚脯氨酸的聚合度为5~50。
6.根据权利要求4所述的荧光探针,其特征在于,所述多肽的氨基酸序列满足以下特征的至少一个:
(1)所述多肽中可被ATG4B蛋白切割的肽段的序列包括GSFGFT;
(2)所述多肽中可被Caspase-3蛋白切割的肽段的序列包括DVEDGCC;
(3)所述多肽中可被MMP-2蛋白切割的肽段的序列包括GRVGLPG;
(4)所述多肽C端的序列包括K,所述多肽N端的氨基酸序列包括R。
7.权利要求1~6任一项所述的荧光探针在制备目标蛋白检测试剂中的应用。
8.一种检测目标蛋白的方法,其特征在于,包括:
将含有目标蛋白的生物样品和权利要求1~6任一项所述的荧光探针混合反应,使所述目标蛋白切割所述荧光探针中的多肽;
检测反应结束后所述荧光探针被所述生物样品中的目标蛋白切割产生的荧光信号。
9.根据权利要求7所述的应用或者权利要求8所述的方法,其特征在于,所述目标蛋白包括ATG4B蛋白、Caspase-3蛋白以及MMP-2蛋白中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述生物样品满足以下特征中的至少一个:
(1)所述生物样品中含有的ATG4B蛋白的浓度为0~20μg/mL;
(2)所述生物样品包括全血、血清、血浆、滑液、细胞或组织中的至少一种。
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