[发明专利]一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法在审
| 申请号： | 202211554420.5 | 申请日： | 2022-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN115927166A | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 董旭东;万慧敏;席佳玮;胡梅;腾玥;林江维;徐建林 | 申请（专利权）人： | 云南省第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735;C12R1/91 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 高敏 |
| 地址： | 650034 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大鼠 原始 胚层 干细胞 分离 方法 | ||
1.一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，包括：
步骤一：获取着床后胚胎,取受精后8.5天雌性大鼠解剖并剪取子宫着床点获取着床后胚胎；
步骤二：从着床胚胎中分离出原始内胚层谱系对应的胚外组织，培养于原始内胚层干细胞培养体系中并置于二氧化碳细胞培养箱中，经过换液传代后获得大鼠原始内胚层干细胞细胞系。
2.根据权利要求1所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，还包括：
步骤三：大鼠原始内胚层干细胞细胞系鉴定。
3.根据权利要求1所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述步骤二中原始内胚层干细胞是从大鼠着床后胚胎中分离建系。
4.根据权利要求1所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述步骤二中原始内胚层干细胞培养体系为胎牛血清(FBS)，白血病抑制因子(LIF)和Wnt信号通路的激活剂(CHIR99021)的条件下培养获得。
5.根据权利要求1所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述步骤二中培养箱为37℃恒温、含5％CO2的二氧化碳细胞培养箱。
6.根据权利要求1所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述步骤二中换液间隔时间为2天，细胞达到80％密度时进行传代。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述方法获得稳定的大鼠原始内胚层干细胞细胞系的时间为25-30天。
8.根据权利要求2所述的一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，其特征在于，所述步骤三中的鉴定方法为分子生物学的免疫荧光和组学的RNAseq两种生物学方法相结合。
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