[发明专利]一种高亲和力结合TET(X2)蛋白的单克隆抗体及其产品和应用

说明书

本发明提供了一种高亲和力结合TET(X2)蛋白的单克隆抗体及其产品和应用，属于单克隆抗体技术领域。本发明首先人工合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的截短型TET(X2)抗原，然后诱导、表达、纯化获得抗原蛋白，接着进行动物免疫，最终获得重链Fd段核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，轻链核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示的单克隆抗体。本发明中的单抗与TET(X2)蛋白亲和力值高达6.2×10supgt;‑10/supgt;nM，可有效应用于替加环素抗药性的快速检测中。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，尤其涉及一种高亲和力结合TET(X2)蛋白的单克隆抗体及其产品和应用。

背景技术

替加环素是第三代四环素家族的抗生素成员，常用于治疗耐碳青霉稀类多重耐药的革兰阴性菌，被认为是抗生素的“最后一道防线”。TET(X)家族是一类单加氧酶，目前已发现有14个成员，TET(X)家族成员之间的氨基酸序列相似性可高达80％。TET(X)家族不仅对四环素家族的全部抗生素具有较强的水解活性，而且是近年来发现了可以通过质粒转移的TET(X)家族成员基因，这可能会造成此基因在临床细菌建播撒及替加环素抗性的蔓延，导致临床细菌耐药性形势发生恶化。TET(X2)是TET(X)家族中最早发现的成员之一，最早发现于黄杆菌科细菌的固有染色体基因组中。目前学术界认为后来发现TET(X)家族的成员可能是由TET(X2)进化而来。因此在临床上快速检测临床菌株的TET(X2)对于临床抗生素用药及细菌耐药性的防控具有重要意义。

目前，临床微生物实验室细菌耐药性的常规检测方法多为肉汤微量稀释法、纸片法等，存在耗时长的缺点。因此，细菌耐药性快速检测新技术的研发已成为检验与临床关注的焦点。针对病原微生物耐药性的快速检测方法不断涌现，如：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOFMS)，光谱技术，电化学生物传感器，综合性分子诊断平台，宏基因组测序等等。虽耗时短，但是这些方法存在费用高昂，且对仪器设备及操作者要求过高的问题，因此，尚不容易普及，也难以及时指导抗感染治疗。

相比之下，基于抗原-抗体反应的快速检测方法因具有敏感性高、特异性好，且检测成本相对较低、对设备和操作者的技术要求相对较低等优点，目前已经在临床上广泛应用，但是目前尚未有将该方法应用于TET(X2)蛋白检测中的相关报道。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种高亲和力结合TET(X2)蛋白的单克隆抗体及其产品和应用。本发明首先人工合成核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的截短型TET(X2)抗原，然后诱导、表达、纯化获得抗原蛋白，接着使用该抗原蛋白进行动物免疫，最终获得重链Fd段核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，轻链核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示的单克隆抗体。本发明中的单抗与TET(X2)蛋白亲和力值高达6.2×10^-10nM，可有效应用于替加环素抗药性的快速检测中。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明提供了一种高亲和力结合TET(X2)蛋白的单克隆抗体，所述重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3，其中CDR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ IDNO.11所示；CDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；CDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；所述轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3，其中CDR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；CDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；CDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。