[发明专利]一种溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物技术技术领域，具体涉及一种溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明所述制备方法以溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白为免疫抗原制备杂交瘤细胞，溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白较为保守，使其作为免疫抗原的特异性较好，使得到的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能够准确识别溶血性曼氏杆菌，专一性更强，避免与多杀性巴氏杆菌、绵羊肺炎支原体和链球菌检测时的交叉反应。

技术领域

本发明属于生物技术技术领域，具体涉及一种溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

溶血性曼氏杆菌是一种严重危害家畜养殖业的人畜共患致病菌，临床上可以导致牛羊出血性败血症等危害严重的病症。溶血性曼氏杆菌一般被认为它是家畜家常带内源性病菌，饲养环境不卫生，加上天气的突变、寒冷、闷热、潮湿拥挤、饲养营养缺乏、饲料突变、长途运输等因素，会使动物产生应激反应，机体抵抗力降低时，溶血性曼氏杆菌则可乘机侵入机体内，经淋巴进入血液，使动物发生内源性感染。

溶血性曼氏杆菌常与巴氏杆菌属其他亚型菌株以及绵羊肺炎支原体等发生混合感染而加剧羊传染性胸膜肺炎的发病过程，导致市场上目前在售的绵羊肺炎支原体灭活疫苗免疫效果不佳。同时，由于市场上目前未见到有效的检测溶血性曼氏杆菌的单克隆抗体和免疫学检测试剂盒，大大降低了对于该菌的早期诊断，为该菌引起的疫病防控带来困难。

发明内容

本发明的目的在于提供一种溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体可以实现溶血性曼氏杆菌的有效检测，实现溶血性曼氏杆菌相关疫病地积极防控。

本发明提供了一种分泌溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，包括如下步骤：

以溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白为免疫抗原对动物免疫，获得免疫脾脏细胞；

将所述免疫脾脏细胞与骨髓瘤细胞株在PEG下进行细胞融合和筛选，得到阳性杂交瘤细胞；

对所述阳性杂交瘤细胞进行克隆化，直至克隆化装置中克隆化细胞的阳性率为100％，得到所述分泌溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。

优选的，所述免疫包括：依次进行第一次免疫、第二次免疫、第三次免疫和加强免疫，每一次免疫时，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白的用量均为20～50μg/只。

优选的，所述第一次免疫的佐剂为弗氏完全佐剂，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白和弗氏完全佐剂的体积比为1：1～3；

所述第二次免疫的佐剂为弗氏不完全佐剂，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白和弗氏不完全佐剂的体积比为1：1～3；

所述第三次免疫的佐剂为生理盐水，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白和弗生理盐水的体积比为1：1～3；

所述加强免疫的佐剂为生理盐水，所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白和生理盐水的体积比为1:1。

优选的，所述第一次免疫与第二次免疫的间隔时间为28天，所述第二次免疫与第三次免疫的间隔时间为28天，所述第三次免疫和加强免疫的间隔时间为14天。

本发明还提供了一种分泌溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，采用上述技术方案所述的制备方法制备得到。

本发明还提供了一种溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体，由上述技术方案所述的杂交瘤细胞分泌产生。

本发明还提供了上述技术方案所述的溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体的制备方法，在致敏的动物腹腔中接种上述技术方案所述的杂交瘤细胞，7～10天后，收集腹水和纯化，得到所述溶血性曼氏杆菌PLPE蛋白单克隆抗体。

优选的，所述杂交瘤细胞的接种数量为(1～2)×10⁶个/只。