[发明专利]一种柯萨奇病毒A组10型抗原检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种柯萨奇病毒A组10型抗原检测试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明所述试剂盒是基于ELISA方法的检测试剂盒，所述试剂盒含有兔抗CV‑A10多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记CV‑A10抗体。该方法在抗原与抗体特异性免疫学反应结合的基础上，加上辣根过氧化物酶的酶促放大效应，具有高特异性和灵敏度，方便快捷，使用广泛，可用于疫苗的研发和生产过程的质量控制。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种柯萨奇病毒A组10型抗原检测试剂盒。

背景技术

手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)的2个主要病原体是肠道病毒71(Enterovirus A71，EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16，CV-A16)。自2008年开始，柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10，CV-A10)在部分地区开始不断流行，与柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6，CV-A6)成为手足口病的优势菌株。并从2011年逐渐成为引起中国手足口病的优势病原体。

CV-A10是除了EV-A71外能引起HFMD重症病例的病毒，这在2009年新加坡学者Ang等研究中已经报告提出。另外，由于2015年上市的EV-A71疫苗对CV-A10病毒无交叉保护作用，所以加强对CV-A10感染的防控工作，已成为我国病毒性传染病管理工作的目标之一。目前市场上对于CV-A10感染没有特异性的治疗药物，也没有CV-A10疫苗可以预防，所以对于CV-A10的感染，疫苗仍然是防控的最有效手段，对于疫苗的研发已有报道。而相关疫苗的研究开发和病毒抗原的快速检测试剂盒是预防控制此传染病的关键。

对于CV-A10的诊断，目前主要依赖病毒核酸检测和病毒分离培养，但是核酸检测易实验室污染或者操作污染而会出现假阳性，当扩增仪温度不准确或者反应液处理不好也会出现假阴性，病毒分离培养需选择合适的细胞进行培养，当产生致细胞病变作用(CPE)可作为病毒感染细胞的直接观察指标，如CPE不明显，则需通过PCR(聚合酶链反应)、WB(蛋白印迹Western blotting)和IF(免疫荧光)等方法鉴定病毒是否感染细胞，并同时对病毒进行鉴定，该方法耗时长，需要5～7天或者更长时间。

目前针对CV-A10的诊断，基层医院和疾病预防控制中心还没有条件开展，加上部分重症病例临床上并无典型的手足口病表现，所以，在疫情暴发初期重症病例难以明确诊断，常被诊断为肺炎而延误最佳治疗时间。只有结合病例的流行病学调查、临床表现，特别是实验室检测结果，才有可能进行明确的诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供一种柯萨奇病毒A组10型抗原检测试剂盒，该试剂盒具有高特异性和灵敏度，方便快捷，使用广泛。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种柯萨奇病毒A组10型抗原检测试剂盒，所述检测试剂盒是基于ELISA方法的检测试剂盒，所述试剂盒含有兔抗CV-A10多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记CV-A10抗体。

优选地，所述兔抗CV-A10多克隆抗体的制备方法包括：将CV-A10纯化病毒免疫日本大耳兔，共3～5次免疫，每次加强免疫前采血分离血清，中和法检测抗体效价，采用HiTrap Pretion G HP纯化抗体，获得兔抗CV-A10多克隆抗体。

优选地，所述兔抗CV-A10多克隆抗体的浓度为1～2.5μg/ml。

优选地，所述辣根过氧化物酶标记CV-A10抗体的稀释度为1:500～1:2500。

优选地，所述检测试剂盒还包括稀释液、洗液、酶标板、显色液和终止液。

优选地，所述稀释液为0.01M PBS，所述洗液为0.01M PBS+0.05％的tween-20，所述终止液为2M H₂SO₄。