[发明专利]表达免疫系统-刺激分子的溶瘤性单纯疱疹病毒载体

说明书

本发明提供了一种表达免疫系统‑刺激分子的溶瘤性单纯疱疹病毒载体，其包含IL12、IL15和IL15受体α亚单位的表达盒，表达盒的侧翼具有经修饰的ICP47启动子。本发明的单纯疱疹病毒载体经过结构改造，可以更好地复制与表达外源基因，表达的蛋白具有良好的稳定性，适于实际应用。

技术领域

本发明总体上涉及表达刺激免疫系统的分子的溶瘤性单纯疱疹病毒(oHSV)载体。

背景技术

溶瘤病毒(OV)已经成为通过溶瘤效应特异性破坏癌细胞的一种治疗方案，其杀伤机制的特征在于，通过病毒裂解行复制的过程使癌细胞裂解。

本发明克服了目前的商业化溶瘤病毒的缺点，并且毒性低、表达水平高、稳定性好。

发明内容

简而言之，本文披露内容涉及保护针对IL12、IL15和/或IL受体15α亚单位中的一种或多种的单纯疱疹病毒载体(HSV载体)。在一种实施方式中，单纯疱疹病毒HSV载体包含IL12、IL15和IL15受体α亚单位的表达盒，表达盒的侧翼具有经修饰的ICP47启动子。

在一种实施方式中，所述经修饰的ICP47启动子的序列至少包含SEQ ID No.584。

在一种实施方式中，所述经修饰的ICP47启动子的序列为SEQ ID No.584。

在一种实施方式中，IL12、IL15和IL15受体α亚单位的编码序列之间的框内具有编码自剪切肽2A的核酸序列。

在一种实施方式中，所述自剪切肽2A的氨基酸序列为：

VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP、QCTNYALLKLAGDVESNPGP、ATNF-SLLKQAGDVEENPGP、HYAGYFADLLIHDIETNPGP、GIFNAHYAGYFADLLIHDIETNPGP、KAVRGYHADYYKQRLIHDVEMNPGP、GATNFSLLKLAGDVELNPGP、EGRGSLLTCGDVEENPGP、AARQMLLLLSGDVETNPGP、FLRKRTQLLMSGDVESNPGP、GSWTDILLLLSGDVETNPGP、TRAEUEDELIRAGIESNPGP、AKFQIDKILISGDVELNPGP、SKFQIDKILISGDIELNPGP、SSIIRTKMLVSGDVEENPGP或CDAQRQKLLLSGDIEQNPGP。

在一种实施方式中，一个或多个IRES序列位于IL12、IL15和IL15受体α亚单位的编码序列之间。

在一种实施方式中，IL15和IL15受体α亚单位通过双向启动子表达。

在一种实施方式中，IL15和IL15受体α亚单位各自跟随一个编码Lys5或Glu5的核酸序列。

在一种实施方式中，hIL15受体α亚单位选自由变体1(SEQ ID NO:3)、变体2(SEQID NO:4)、变体3(SEQ ID NO:5)、变体4(SEQ ID NO:6)组成的组。

在一种实施方式中，包含IL12、IL15和IL15受体α亚单位的表达盒被插入到HSV的内部重复区或HSV基因组的末端重复区中。

在一种实施方式中，单纯疱疹病毒HSV载体进一步包含一种或多种PD-L1阻断肽的表达盒。

在一种实施方式中，PD-L1阻断肽的表达盒被插入HSV病毒基因的UL3和UL4之间。

在一种实施方式中，单纯疱疹病毒HSV载体进一步包含编码连接至所述PD-L1阻断肽的3’-端的Fc区的序列。

在一种实施方式中，连接至所述PD-L1阻断肽的3’-端的Fc区的序列为编码IgG4Fc区域的序列。