[发明专利]噻苯隆在诱导人参悬浮细胞产生叶绿体中的应用

权利要求书

1.噻苯隆在诱导人参悬浮细胞产生叶绿体中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于噻苯隆的使用浓度为0.1-0.2mg/L。

3.一种诱导人参悬浮细胞产生叶绿体的方法，其特征在于将诱导得到的35-42天的人参愈伤组织，含有噻苯隆的培养基中进行悬浮培养，悬浮培养过程中控制光照强度为40-45umolm^-2s^-1，光照时间为每天16-18h光照，6-8h黑暗。

4.根据权利要求3所述的诱导人参悬浮细胞产生叶绿体的方法，其特征在于具体步骤为：

(1)将人参根部消毒后，切成适中的小块放入诱导培养基，黑暗中培养得到愈伤组织；

(2)将愈伤组织加入到悬浮培养液中，置于黑暗环境下悬浮培养，之后过滤筛，得到人参单悬浮细胞；

(3)将得到的人参悬浮细胞在含有噻苯隆的培养基上悬浮培养，同时开启光照，控制光照强度为40-45umolm^-2s^-1，光照时间为每天16-18h光照，6-8h黑暗，获得含有叶绿体的人参悬浮细胞。

5.根据权利要求4所述的诱导人参悬浮细胞产生叶绿体的方法，其特征在于步骤(1)具体为将人参根部清洗后，在15％-20％的次氯酸钠溶液浸泡20-30min，无菌水清洗4-6次，吹干后切成10-15mm的人参方块接种在诱导培养基中，在培养箱中黑暗培养，培养温度25℃，所述诱导培养基为MS培养基，在其中添加3％蔗糖、2mg/L 2，4-D和6-1.5mg/L 6-BA。

6.根据权利要求4所述的诱导人参悬浮细胞产生叶绿体的方法，其特征在于步骤(2)具体为将1.5-2mg的人参愈伤组织接入含有50ml悬浮培养液中，120rpm/min，25℃，光照下摇5-7天，期间换液一次，每次倒出2/3的培养液，再加入2/3的新鲜培养液，然后用滤筛过滤出人参单细胞，悬浮培养液为MS培养基，在其中添加3％蔗糖、2mg/L 2，4-D和1.5mg/L 6-BA。

7.根据权利要求4所述的诱导人参悬浮细胞产生叶绿体的方法，其特征在于步骤(3)具体为对得到的人参悬浮细胞重悬在含有培养液中，光照强度40-45umolm^-2s^-1下，光照时间为16-18h光照，6-8h黑暗下悬浮培养，期间每5-7天换液一次；所述培养液为MS培养基，在其中添加3％蔗糖、2mg/L 2，4-D、0.1-0.2mg/L TDZ、1.5mg/L 6-BA。