[发明专利]一种sST2检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种sST2检测卡的制备方法，所述sST2检测卡包括底衬、设置于所述底衬上表面内部的包被膜、搭接于所述包被膜一端的样品垫，以及搭接设置于所述包被膜另一端的吸水纸，其特征在于，包括以下步骤：

Ⅰ.对稀土纳米探针进行活化，制备活化稀土纳米探针；

Ⅱ.对活化稀土纳米探针按照50～200μg/200μL加入sST2单克隆抗体1，用封闭液封闭后高速离心，用保存液洗涤并重悬，0～10℃避光保存；

Ⅲ.制备包被膜：取硝酸纤维素膜，分别用sST2单克隆抗体2和羊抗兔IgG抗体作为检测线和质控线平行划于所述硝酸纤维素膜上进行包被，烘干，制得包被膜；

Ⅳ.制备样品垫：用样品垫处理液含0.5％NaCl、0.5％S17、1％BSA、1mg/mL抗RBC抗体的20mM、pH8.0的Tris-HCl浸泡样品垫37度烘干过夜，在样品垫上用稀土纳米探针标记的sST2单克隆抗体1喷涂一条线，烘干；

Ⅴ.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、包被膜和吸水纸得到试纸板，切割即得到所述sST2检测卡。

2.根据权利要求1所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，步骤Ⅰ所述稀土纳米探针为核壳结构镱铒共同掺杂的氟化钇钠包覆氟化钇钠壳层，其组成为：NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄；其中，NaYF₄:Yb,Er为镱铒掺杂的NaYF₄核结构；@表示NaYF₄包覆在NaYF₄:Yb,Er表面。

3.根据权利要求1所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫喷涂有微球线，所述微球线为由稀土纳米探针标记的sST2单克隆抗体1；所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，所述检测线靠近所述样品垫；所述检测线包被有sST2单克隆抗体2，质控线包被有羊抗兔IgG抗体。

4.根据权利要求2所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，所述活化稀土纳米探针，其制备方法包括：

步骤一：合成氟化钇钠核结构：在容器中，以油酸、1-十八烯、铒盐、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液，并进行反应；随后用环己烷乙醇混合液洗涤，分散于环己烷中，得到NaYF4:Yb,Er纳米探针-环己烷溶液；

步骤二：制备核壳结构稀土纳米探针：以油酸、1-十八烯、醋酸钇、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液、NaYF4:Yb,Er纳米探针-环己烷溶液进行反应，用环己烷乙醇混合液洗涤3～4次，分散于环己烷中；用酸洗法将探针转移至水相，再在探针表面修饰羧基，得到水溶性NaYF4:Yb,Er@NaYF4稀土纳米探针；

步骤三：活化稀土纳米探针：对步骤二的稀土纳米探针进行超声波处理和离心处理，对沉淀物用10～100mM，pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤；加入碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺，混匀后高速离心，对沉淀物用pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤，即得到活化稀土纳米探针。

5.根据权利要求1所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，所述样品垫上喷涂的稀土纳米探针标记的sST2单克隆抗体的含量为50～200μg抗体/200μL荧光微球。

6.根据权利要求1所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，所述检测线中sST2单克隆抗体2包被浓度为0.1～2mg/mL、用量为0.5～1.5μL包被液量/cm膜，所述质控线中羊抗兔IgG抗体包被浓度为0.5～2mg/mL、用量为0.5～1.5μL包被液量/cm膜。

7.根据权利要求7所述的sST2检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，用微球稀释液将稀土纳米探针标记的sST2单克隆抗体稀释8～30倍，用量为2～4μL液量/cm样品垫；所述微球稀释液为含0.5％BSA、20％蔗糖的20mM、pH8.0的Tris-HCl缓冲液。

8.一种根据权利要求1～7任一项所述的sST2检测卡的制备方法制得的的sST2检测卡。