[发明专利]工程化CAS9核酸酶及其使用方法在审

申请号：	202211612990.5	申请日：	2022-12-15
公开（公告）号：	CN116286735A	公开（公告）日：	2023-06-23
发明（设计）人：	黄兆麟;袁紫璐	申请（专利权）人：	港大科桥有限公司;肿瘤及免疫学研究中心有限公司
主分类号：	C12N9/22	分类号：	C12N9/22;C12N15/864;C12N15/113
代理公司：	北京市柳沈律师事务所 11105	代理人：	牟科
地址：	中国香港***	国省代码：	暂无信息
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摘要：
搜索关键词：	工程 cas9 核酸酶及其使用方法
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【权利要求书】：

1.一种SaCas9变体，其包含突变Y239H且不包含突变R245A。

2.根据权利要求1所述的变体，其还包含突变E782K、N968K和R1015H。

3.根据权利要求1或2所述的变体，其中所述变体不包括任何其它突变或其它突变的组合，使得在具有表达具有序列CACCTACGGCAATCTGACCCTGAAGT(SEQ ID NO:1)的脱靶sgRNA的报告构建体的OVCAR8-ADR细胞、SK-N-MC细胞和/或MHCC97L细胞中，在第15天在GFP破坏测定中，所述变体比SaCas9变体v3.2具有更大的脱靶活性，其中所述SaCas9变体v3.2仅具有突变N419D、R654A、G655A、E782K、N968K和R1015H。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的变体，其中所述变体不包括任何其它突变或其它突变的组合，使得在具有表达具有序列CACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGT(SEQ ID NO:2)的在靶sgRNA的报告构建体的OVCAR8-ADR细胞、SK-N-MC细胞和/或MHCC97L细胞中，在第15天在GFP破坏测定中，所述变体具有小于SaCas9变体KKH-SaCas9的在靶活性的0.5的在靶活性，其中所述SaCas9变体KKH-SaCas9仅具有突变E782K、N968K和R1015H。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的变体，其还包含一种或多种选自下组的突变：T238A、T392A、N394T、N394A、N413A、Q414R、N419A、N419D、N419S、N419G、R499A、Q500A、Y651H、R654A和G655A。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的变体，其包括突变N419D。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的变体，其包括突变N419S。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的变体，其包括突变N419G。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的变体，其包括突变R499A。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的变体，其包括突变Q500A。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的变体，其包括突变Y651H。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的变体，其包括突变R654A。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的变体，其包括突变G655A。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的变体，其包括突变Q414R。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的变体，其包括突变N394T。

16.根据权利要求1-14中任一项所述的变体，其包括突变N394A。