[发明专利]一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A及其应用

权利要求书

1.一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种编码上述串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

3.一种重组表达质粒，含有权利要求2编码串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的核苷酸序列，重组表达质粒核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.根据权利要求3所述的重组表达质粒，其特征在于：出发载体为pET-28b(+)，所述重组表达质粒为pET-28b(+)-spaAE，即在多克隆位点插入编码串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的核苷酸序列SEQ ID No.2。

5.一种重组大肠杆菌，由权利要求3或4重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)株得到。

6.一种制备如权利要求1或2所述的串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将编码串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的核苷酸序列SEQ ID No.2进行大肠杆菌偏爱密码子优化，优化后的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示，人工合成，插入pET-28b(+)载体，获得重组表达质粒；

(2)将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3株)，获得重组表达菌株；

(3)重组表达菌株经发酵培养、诱导表达、菌体破碎、包涵体变性、离子层析、透析复性后获得串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A；

所述重组表达质粒为在pET-28b(+)载体克隆位点插入编码串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中诱导表达时温度为25℃；诱导表达时间为6h，IPTG诱导表达浓度为0.5mmol/L。

8.一种猪丹毒亚单位疫苗，其特征在于将权利要求1所述的串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A与免疫佐剂混合得到；所述免疫佐剂为Manganese Jelly(MnJ)Adjuvant(γ)胶体锰佐剂。

9.根据权利要求8所述的猪丹毒亚单位疫苗，其特征在于：所述的猪丹毒亚单位疫苗中串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的浓度不低于100μg/头份。

10.权利要求1所述的串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A在制备猪丹毒疫苗中的应用。