[发明专利]一种表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗及其制备方法，涉及核酸疫苗领域。本发明成功制备了一种表达猫细小病毒蛋白的mRNA疫苗，构建包含猫细小病毒VP2蛋白的mRNA载体质粒，并用于制备加帽修饰的mRNA，结合脂质体包裹方案制备mRNA疫苗，并应用于猫泛白细胞减少症的预防。该方法在猫泛白细胞减少症研究和疫苗创制上具有应用价值，能够大力推进疫苗的转化应用。

技术领域

本发明涉及核酸疫苗领域，具体而言涉及一种表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗，包含猫细小病毒VP2蛋白mRNA疫苗的制备。

背景技术

猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia，FP)是由猫细小病毒(Felineparvovirus，FPV)引起的猫的一种急性、高度接触性传染病。FPV感染的典型临床症状是双相热、呕吐、腹泻、脱水，循环障碍及白细胞严重减少和出血性肠炎。主要感染1岁以内的幼猫，通常情况下，对1岁以下的猫的致死率为50％～60％，对5月龄以下的幼猫的死亡率高达80％～90％。如果母猫在怀孕期感染该病毒，则造成死胎、流产等症状。最初于20世纪90年代由Verge首次鉴定出该病毒，之后在加拿大、美国、日本等许多国家都有发现，我国在1985年首次分离到该病毒，之后张振兴和李刚等人报道在河北、河南、浙江等地均有猫细小病例的发生。该病在世界上广泛存在，被认为是猫重要的传染病之一。FPV宿主广泛，除感染家猫外，还能感染其他猫科动物(如虎、豹)、鼬科动物(如貂)及熊科(如浣熊)严重危害宠物猫及野生猫科动物的生命健康。FPV属于细小病毒科(Parvoviridae)，细小病毒属(Parvovirus)，是一种能够自我复制的无囊膜的单股正链DNA病毒。FPV病毒粒子约为20-30nm，呈等轴对称的正二十面体。FPV基因组长约5Kb，包括一个长的编码区域和两端由独特的回文结构组成，回文序列碱基配对形成发卡双链体，编码区主要编码两个主要的开放阅读框，分别编码非结构蛋白NS(NS1和NS2)和病毒结构蛋白VP(VP1和VP2)。

VP2蛋白约占所有结构蛋白的90％，VP1蛋白占所有结构蛋白的10％，因此VP2蛋白是FPV编码的主要的抗原蛋白，在免疫应答、识别受体及感染组织的过程中发挥着重要作用。VP2蛋白的三级结构主要由Loop1-Loop5这5个环形结构围绕8个反向平行的反折叠片构成的三折叠单元纤突、肩部和顶部形成的，与病毒的血凝特性和致病性密切相关。其中Loop3是组成病毒三折叠蛋白单元纤突的肩部，不直接参与病毒衣壳蛋白对转铁蛋白受体的识别，而是在立体空间上对提高病毒的感染效率。VP2蛋白上有多个抗原识别位点，能够刺激机体产生中和抗体，起到免疫保护作用。由VP2蛋白组成的病毒样颗粒可以用于制备多种病毒的候选疫苗，对该病毒的复制及感染宿主的范围具有一定的决定作用，并且能够很好的诱导体液和细胞免疫。

相比传统疫苗，mRNA疫苗作为新型疫苗的形式，具有生产工艺简单、开发速度快、无需细胞培养、成本低。相较与DNA疫苗，mRNA疫苗无需进入细胞核，没有整合至宿主基因组的风险，半衰期可以通过修饰进行调整。mRNA疫苗可提供对适应性和先天免疫力的综合刺激，即原位抗原表达和危险信号传递；可以诱导“平衡”免疫反应，包括体液和细胞效应因子以及免疫记忆。

发明内容

本发明针对现有宠物疫苗产品中存在的不足，提供了一种预防或治疗猫泛白细胞减少症的表达猫细小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗制备方法及其应用。

本发明的技术方案：

一种重组mRNA合成质粒，包括质粒骨架序列、编码猫细小病毒VP2蛋白的基因；所述编码猫细小病毒VP2蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

其中，猫细小病毒(Feline panleukopenia virus，FPV)属于细小病毒科病毒(Panleukopenia)，主要感染1岁以内的幼猫，引起双相热、呕吐、腹泻、脱水，循环障碍及白细胞严重减少和出血性肠炎。