[发明专利]一株针对猪δ冠状病毒S1蛋白构象表位的中和性单克隆抗体

说明书

本发明属于免疫学领域，涉及一株针对猪δ冠状病毒S1蛋白构象表位的中和性单克隆抗体和分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。中和性单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的CDR1、CDR2和CDR3；轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO:4、RAS、SEQ ID NO:5所示的CDR1、CDR2和CDR3。分泌该中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2022248。本发明的单克隆抗体具有治疗和预防猪δ冠状病毒感染猪的临床效果，也可用于制备猪δ冠状病毒检测试剂或者试剂盒。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一株针对猪δ冠状病毒S1蛋白构象表位的中和性单克隆抗体和分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)是一种新发现的肠道冠状病毒，属于冠状病毒科δ冠状病毒属成员，主要引起新生仔猪呕吐、腹泻、脱水和死亡。临床症状与猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)和猪传染性胃肠炎(Porcinetransmissible gastroenteritis，TGE)相似。迄今为止，全球已有10多个国家或地区报道了PDCoV的发生与流行，对养猪业构成巨大威胁，而且PDCoV还具有跨物种传播的潜力，可以感染鸡、火鸡、牛、小鼠甚至人类，具有重要的公共卫生意义和基础研究价值。

PDCoV呈球形，直径为60nm～180nm。病毒粒子有囊膜，囊膜表面有Spike(S)蛋白形成的棒状纤突。核衣壳呈螺旋对称，由蛋白质衣壳包裹单股RNA基因组形成，位于病毒粒子的中心(Ma Y M,Zhang Y,Liang X Y,et al.2015.Origin,evolution,and virulence ofporcine deltacoronaviruses in the United States.mBio,6(2):e00064.)。病毒粒子包含4个主要的结构蛋白：纤突蛋白S、小膜蛋白E、膜蛋白M和衣壳蛋白N，其中S蛋白、E蛋白和M蛋白与脂质双层共同构成病毒的囊膜，N蛋白构成病毒的衣壳。PDCoV基因组全长约为25.4kb，在5′端有帽子结构和非编码区(5′UTR)，3′端有poly(A)尾和3′UTR。基因组包含至少9个开放阅读框(open reading frame,ORF)，由5′端至3′端的排列顺序为ORF1a、ORF1b、S、E、M、NS6、N、NS7、NS7a，共编码15个成熟的非结构蛋白(nsp2～nsp16)、4个结构蛋白(纤突蛋白S、小膜蛋白E、膜蛋白M和核衣壳蛋白N)和3个辅助蛋白(NS6、NS7和NS7a)。编码辅助蛋白NS6的基因位于M基因和N基因之间，NS7基因位于N基因内部，NS7a基因位于NS7基因C端(Fang P X,Fang L R,Hong Y Y,et al.2017.Discovery of a novel accessory proteinNS7a encoded by porcine deltacoronavirus.J Gen Virol,98(2):173-178.；Woo P C,Lau S K,Lam C S,et al.2012.Discovery of seven novel Mammalian and aviancoronaviruses in the genus deltacoronavirus supports bat coronaviruses as thegene source of alphacoronavirus and betacoronavirus and avian coronavirusesas the gene source of gammacoronavirus and deltacoronavirus.J Virol,86(7):3995-4008.)。PDCoV的S蛋白属于I型膜蛋白，在病毒囊膜表面以三聚体形式存在，形成病毒的纤突，其主要功能是识别受体，介导病毒进入宿主细胞，对病毒的宿主范围和组织嗜性起决定性作用，同时也是诱导中和抗体产生的主要蛋白。