[发明专利]一种基于噬菌体基因为靶标的柑橘黄龙病菌检测引物及其应用

权利要求书

1.一种基于噬菌体基因为靶标的柑橘黄龙病菌检测引物，其特征在于，包括引物对GP04-F/GP04-R，其上下游引物序列依次如SEQ ID NO.1～2所示。

2.根据权利要求1所述柑橘黄龙病菌检测引物，其特征在于，还包括引物对CLas-4G/HLBr，其上下游引物序列依次如SEQ ID NO.3～4所示。

3.权利要求1或2所述柑橘黄龙病菌检测引物在检测柑橘黄龙病菌亚洲种中的应用。

4.一种柑橘黄龙病菌亚洲种的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样品基因组DNA；

S2.以步骤S1的DNA为模板，利用权利要求1或权利要求2所述柑橘黄龙病菌检测引物进行单重或双重实时荧光PCR反应，若实时荧光定量PCR检测得到的Ct值大于32则表示待测样品未感染柑橘黄龙病亚洲种，若Ct值小于32则表示待测样品感染柑橘黄龙病亚洲种。

5.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于，所述步骤S2所述单重实时荧光PCR反应的扩增体系为：ddH₂O 8.0μL，Supermix 10.0μL，10μmol/L GP04-F0.5μL，10μmol/L GP04-R0.5μL，DNA模板1.0μL，共20μL；双重实时荧光PCR反应的扩增体系为：ddH₂O 7.0μL，Supermix 10.0μL，10μmol/L CLas-4G 0.5μL，10μmol/L HLBr 0.5μL，10μmol/L GP04-F0.5μL，10μmol/L GP04-R 0.5μL，DNA模板1.0μL，共20μL。

6.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于，步骤S2所述单重或双重实时荧光PCR反应的反应条件为：95℃，3min；95℃10s，60℃30s，40个循环；在每个循环的60℃结束时进行荧光信号读取。

7.权利要求1或2所述柑橘黄龙病菌检测引物在制备柑橘黄龙病菌亚洲种检测试剂盒中的应用。

8.一种柑橘黄龙病菌亚洲种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述柑橘黄龙病菌检测引物。

9.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，还包括实时荧光PCR反应所需试剂。

10.权利要求8或9所述柑橘黄龙病菌检测引物在检测柑橘黄龙病菌亚洲种中的应用。