[发明专利]一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用

说明书

本发明提供了一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用。本发明的短小芽孢杆菌LX4400的保藏编号为CGMCC No.25787，该短小芽孢杆菌LX4400为大豆根瘤菌的伴生菌，在实际应用过程中与大豆品种的匹配具有广谱性。上述短小芽孢杆菌LX4400在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用。

背景技术

国际上大豆根瘤菌的研究和应用已有一百多年的历史，无论发达国家还是发展中国家，都十分重视根瘤菌接种技术在大豆种植中的推广应用与研究工作。近几十年来我国在大豆种植上忽视地下部分，种植时依赖化学肥料，与国际上普遍接种应用根瘤菌技术相差甚远。主要原因是由于根瘤菌施用接种技术落后，造成了根瘤菌接种效率低，施用效果不理想。所以如何能更加有效的接种根瘤菌成为了研究的热点。

为了更加有效地提高根瘤菌接种效果，促进根瘤菌应用技术的推广，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种短小芽孢杆菌LX4400及其应用，该短小芽孢杆菌LX4400在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果。

本发明提供一种短小芽孢杆菌LX4400，该短小芽孢杆菌LX4400的保藏编号为CGMCC No.25787。

特别是，该短小芽孢杆菌LX4400分离自大豆植株根瘤内部，是根瘤菌的伴生菌；具体地，所述分离过程包括：将新鲜的大豆根瘤表面消毒，无菌操作条件下挤出汁液，涂抹于根瘤菌固体平板培养基上，28-30℃静置培养，待培养物长出后，经过反复划线纯化，获得该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物。

进一步地，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证过程是：将该短小芽孢杆菌LX4400的纯培养物和大豆根瘤菌在大豆播种时随种接入，待大豆长至初花期，采集新鲜、饱满的大豆根瘤，对大豆根瘤进行表面消毒，无菌操作条件下取内部汁液涂抹于根瘤菌固体平板培养基进行培养，经过反复划线纯化，在不同品种大豆根瘤内部均再次分离获得短小芽孢杆菌LX4400；更具体地，该短小芽孢杆菌LX4400回接验证所用豆种表面经过消毒处理，栽培土、浇灌用水均经过121℃灭菌30min的处理。

本发明的短小芽孢杆菌LX4400分离自大豆植株根瘤，该菌株与大豆根瘤菌共同紧密生长，在菌株分离过程中与根瘤菌很难分离，经回接实验验证该菌株为大豆根瘤菌的伴生菌。对分离得到的菌株进行16SrDNA测序，结果用Blast软件进行同源性比对，结果表明该菌株与短小芽孢杆菌的同源性为99％，构建系统发育树，证明该菌株为短小芽孢杆菌；同时，结合菌落、菌体形态特征及理化特性，从而鉴定该菌株为短小芽孢杆菌。

本发明的短小芽孢杆菌LX4400分类命名为：短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LX4400；保藏编号为：CGMCC No.25787；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号楼中国科学院微生物研究所；保藏时间为：2022年09月23日。

研究表明：本发明的短小芽孢杆菌LX4400为大豆根瘤菌的伴生菌，在实际应用过程中与大豆品种的匹配具有广谱性，在与根瘤菌同时施用时具有明显的增效作用，不仅能够显著提高植株的生物量，还能够明显增强植株的抗性，有利于提高根瘤菌的实际应用效果；此外，本发明的短小芽孢杆菌LX4400在与防御假单胞菌或荧光假单胞菌混配时能够有效延长防御假单胞菌和荧光假单胞菌的存活时间，有利于提高防御假单胞菌和荧光假单胞菌的储存稳定性并延长产品货架期。

本发明还提供一种短小芽孢杆菌菌剂，通过对上述的短小芽孢杆菌LX4400进行发酵制得。