[发明专利]一种表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH的制备方法及产品和应用

权利要求书

1.一种表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）通过种子生长法合成金纳米星（GNS）颗粒；

（2）在上述步骤（1）制备的GNS溶液中加入5~20 mM巯基乙酸，混匀8~12小时，用70%乙醇溶液清洗干净后，加入10~40 mM 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl，室温反应20~30分钟，再加入5%~20%聚乙烯亚胺，室温反应12~24小时，用去离子水清洗干净后，即可获得聚乙烯亚胺修饰的金纳米星颗GNS@PEI；

（3）将5~50 mM EDC活化的乙二酸溶液与上述步骤（2）制备的GNS@PEI颗粒混匀，室温反应12~24小时，用去离子水清洗干净，即可获得羧基修饰的GNS@PEI颗粒，即GNS@PEI-COOH纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的一种表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH的制备方法，其特征在于，所述的种子生长法合成GNS颗粒的制备方法包括：

① 1 mM四氯金酸溶液与1%柠檬酸三钠溶液按3:20比例于煮沸条件下不断搅拌15分钟，待溶液冷却至室温，从而获得金种子溶液；

②将上述步骤①中制备的金种子溶液与1 M盐酸、0.25 mM四氯金酸溶液按1:1:100比例混匀，然后同时加入0.5倍金种溶液体积的6 mM硝酸银溶液和0.1 M抗坏血酸溶液，混匀10~30分钟，从而获得稳定的GNS溶液。

3.根据权利要求1或2所述的一种表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH的制备方法，其特征在于，按下述步骤：

（1） 通过种子生长法合成金纳米星（GNS）颗粒，按下述步骤

①将80 mL的1 mM四氯金酸溶液与12 mL的1%柠檬酸三钠溶液于100℃煮沸条件下不断搅拌15分钟，待溶液冷却至室温，从而获得金种子溶液；

②取1 mL上述步骤1）制备的金种子溶液与1 mL 1 M盐酸、100 mL0.25 mM的四氯金酸溶液混匀后，同时加入0.5 mL6 mM硝酸银溶液和0.5 mL0.1 M抗坏血酸溶液，混匀30分钟，从而获得稳定GNS溶液；

（2）在上述步骤（1）制备的GNS溶液中加入10 mM巯基乙酸，混匀12小时，用70%乙醇溶液清洗三次后，用100 mL去离子水重悬，加入0.2 g10 mM 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl，室温反应30分钟，再加入5 g5%聚乙烯亚胺（PEI），室温反应24小时，用去离子水清洗干净后，即可获得聚乙烯亚胺修饰的金纳米星颗GNS@PEI；

（3）将100 mL的10 mM EDC活化的乙二酸溶液与上述步骤（2）制备的GNS@PEI颗粒混匀，室温反应24小时，用去离子水清洗干净，即可获得羧基修饰的GNS@PEI颗粒，即GNS@PEI-COOH纳米颗粒，将其用去离子水重悬后，4℃保存备用。

4.一种表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH，其特征在于根据权利要求1-3任一所述方法制备得到，所述的纳米颗粒为金纳米星，其表面修饰有聚乙烯亚胺和羧基分子。

5.一种根据权利要求4所述表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH作为生物分子载体在生物医学领域中的应用。

6.一种根据权利要求5所述的应用，其特征在于：表面改性的纳米金颗粒GNS@PEI-COOH与EGFR抗体偶连，步骤如下：

取1 mL的GNS@PEI-COOH颗粒溶液，与0.1 mL50 mmol EDC和0.2 mL 50 mM sulfo-NHS混匀，室温反应20分钟，10000 rpm离心10分钟，用0.6 mL PBS重悬，pH7.4，加入0.4 mL 0.5mg/mL EGFR抗体，室温反应2小时，而后10000 rpm离心10 rpm，收集上清，用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测上清液中的蛋白质浓度，从而计算抗体的结合率；偶连抗体的纳米金颗粒用PBS溶液清洗三次，用PBS重悬后，4℃保存。