[发明专利]氯法拉滨作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用

说明书

本发明公开了氯法拉滨作为HIV‑1潜伏感染激活剂的应用。通过构建整合了融合表达GFP报告基因的全长HIV‑1的Jurkat潜伏感染细胞系，利用高通量筛选成药库证实氯法拉滨具有激活HIV‑1潜伏感染的能力。后进一步通过在具有不同HIV‑1整合位点的J‑Lat 6.3、J‑Lat8.4、J‑Lat 10.6等3种HIV‑1潜伏感染细胞模型克隆株中的实验证实，该药物的确存在良好的激活HIV‑1潜伏感染的作用。经实验证明，氯法拉滨在J‑Lat 10.6细胞中的EC50为8.92μM，且在能够有效激活HIV‑1潜伏感染的同时，对于细胞活力没有明显影响。同时，还明确了氯法拉滨作为一种HIV‑1潜伏感染激活协同增强剂的使用潜力，为与其它HIV‑1潜伏感染激活剂的组合用药提供了更多的选择，证实氯法拉滨在HIV‑1潜伏感染的激活方面具有重要的研发价值和开发意义。

技术领域

本发明涉及化合物的新应用，特别涉及氯法拉滨作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用。

背景技术

HIV-1病毒是一种感染人类免疫系统细胞的逆转录病毒。它通过攻击人体T淋巴细胞从而破坏人体免疫系统，最终导致获得性免疫缺陷综合征，即艾滋病的产生。1981年，该病毒首次被发现，此后至今，研究人员一直致力于控制并清除该病毒，以期实现治愈艾滋病的目的。目前临床上对于艾滋病的治疗通常采用高效抗逆转录病毒疗法，简称HAART。该治疗方法通过患者长期且规律的服药，能够有效的抑制病毒的复制，控制病人外周血中的病毒载量至检测下限。但是该治疗方法并不能彻底清除病毒，因为HIV-1可将自身基因组整合至人体CD4⁺T淋巴细胞基因组并进入静息状态，形成HIV-1潜伏感染储存库。处于静息状态的潜伏病毒无法被常规抗HIV-1药物识别，而病人一旦停止用药，这些病毒会因各种原因被激活进入复制状态，最终导致病情反复。综上所述，HIV-1潜伏感染储存库的存在是艾滋病治愈的巨大障碍。而如何有效的清除HIV-1潜伏储存库则是近年来HIV-1领域的研究热点之一。对于这一问题，目前最受认可的清除方式是“shock and kill”，即先用潜伏感染激活剂激活潜伏感染病毒，再利用已有的抗HIV-1药物将激活病毒杀灭。因此，研发出更多具有安全性、高效性、广谱性的HIV-1潜伏感染激活剂是当前亟待解决的问题之一。

氯法拉滨(Clofarabine)，化学式为C₁₀H₁₁ClFN₅O₃，结构式为

又称克罗拉滨，是一种抗代谢药物，临床上用于治疗儿童急性淋巴细胞性白血病。现有研究未公开氯法拉滨具有激活HIV-1潜伏感染储存库，以及协同增强其它HIV-1潜伏感染激活剂激活效应的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供氯法拉滨作为HIV-1潜伏感染激活剂的应用。

实验数据显示，氯法拉滨具有良好的激活HIV-1潜伏感染的能力。本发明基于实验室构建的整合了全长HIV-1且融合表达GFP的Jurkat潜伏感染细胞模型，通过高通量筛选含有1600种成药的成药库发现氯法拉滨能够有效激活HIV-1潜伏感染。

在此基础上，进一步利用多种包含不同HIV-1整合位点的J-Lat潜伏感染细胞模型重复验证，发现氯法拉滨在多种HIV-1潜伏感染细胞模型中，对不同整合位点的HIV-1均能有效且稳定激活。

后通过实验测定，氯法拉滨在J-Lat 10.6细胞中的EC50为8.92μM，且在该浓度下对细胞活力的影响较小。此外，氯法拉滨能够有效协同增强多种HIV-1潜伏感染激活剂的激活效果，可构建多种组合用药方式，是一种高效的HIV-1潜伏感染协同增强剂。下一步将分别在人原代CD4⁺T细胞的HIV-1潜伏感染模型和病人临床样本中分别验证氯法拉滨对潜伏感染病毒的激活作用。氯法拉滨是已经在临床上使用的抗肿瘤药物，有长期的使用经验。但目前尚未有人报道其作为HIV-1潜伏感染激活剂的相关用途。本专利旨在为氯法拉滨作为HIV-1潜伏感染激活剂的进一步开发提供有力的理论基础和实践基础，证明其具有重要的研发价值和开发意义。