[发明专利]一种动物乳杆菌在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明涉及微生物及肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种动物乳杆菌在制备抗肿瘤药物中的应用。一种动物乳杆菌在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，动物乳杆菌为动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)ATCC35046。本发明惊奇地发现动物乳杆菌ATCC35046可以抑制肿瘤。

技术领域：

本发明涉及微生物及肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种动物乳杆菌在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

黑色素瘤是由黑色素细胞发生基因突变而引发的一种高度恶性皮肤肿瘤。黑色素瘤易发于低龄和中年女性以及55岁以上的男性。引发黑素瘤的外在环境因素主要是太阳紫外线UV-B和人工紫外线UV-A，内在因素包括基因易感和遗传等。黑色素瘤是致死率最高的一种皮肤肿瘤。目前，黑色素瘤的传统治疗方法主要包括手术切割、放疗和化疗等，但用这些方法治疗后，肿瘤易复发和转移，也容易产生耐药性。新型的免疫疗法，比如单克隆抗体，纳武单抗，派姆单抗，伊匹单抗等，其响应率较低，成本较高。因此，寻找新的有效治疗黑色素瘤的药物具有重要研究意义。

益生菌是一类能够对宿主产生有益作用的微生物,与人体的健康密切相关。研究表明益生菌能激活机体巨噬细胞、NK细胞等多种免疫细胞，诱导产生肿瘤坏死因子-α、β(TNF-α、β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)、一氧化氮(NO)等效应因子，具有免疫调节作用。但单独使用一种或多种益生菌，往往对肿瘤的治疗效果不佳。因此目前的应用策略主要有两种：一是口服益生菌联合化疗或者免疫疗法用于治疗肿瘤，如有文献报道：口服益生菌(如双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌或肠球菌等)能增强免疫检查点抑制剂(如抗PD1疗法)或细胞因子在黑色素瘤中的免疫治疗效果。另一种策略是将重组蛋白的基因导入益生菌，通过工程益生菌在体表达具有抗肿瘤作用的活性蛋白质因子，发挥抗肿瘤作用。比如有文献报道：将益生菌大肠埃希菌Nissle1917(EcN)改造成可产生环状双AMP(CDA)的工程菌用于治疗肿瘤。环状双AMP是STING(干扰素基因的刺激物)途径的刺激物，STING途径在激活抗原提呈细胞(APC)和呈递肿瘤抗原而引发的抗肿瘤免疫应答中起关键作用。

动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)是一种存在于动物的牙菌斑、肠道或粪便中的益生菌。动物乳杆菌广泛用于乳制品发酵，且具有抑菌，尤其是抑制多重耐药性病原菌的活性。同时在抑制过敏发作、改善肥胖、减轻胰岛素抵抗和降低胆固醇等方面也具有良好的作用。而该动物乳杆菌的抗肿瘤作用尚未报道。

发明内容：

要解决的技术问题：

本发明筛选了一株能有效治疗黑色素瘤的动物乳杆菌，其能强烈地激活肿瘤微环境中的CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞，逆转肿瘤免疫抑制微环境，发挥良好的抗肿瘤作用。

技术方案：

一种动物乳杆菌在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，动物乳杆菌为动物乳杆菌(Lactobacillus animalis)ATCC35046。

动物乳杆菌菌种(Lactobacillus animalis)ATCC35046购自北纳生物-北京北纳创联生物技术研究院。冻存的动物乳杆菌ATCC35046在固体培养基复苏后，挑取单菌落至液体培养基活化，然后进行扩大培养，待其生长至对数期即OD值约为0.8(2×10⁸CFU/mL)后，离心得到菌体，PBS清洗3次后，用PBS重悬备用。

所述的肿瘤为黑色素瘤。

作用机制：将动物乳杆菌ATCC35046通过瘤周组织皮下注射给药，该动物乳杆菌ATCC35046能通过促进树突状细胞的成熟而强烈地激活肿瘤微环境中的CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞，从而有效杀伤肿瘤细胞，达到肿瘤免疫治疗的作用。

具体而言：