[发明专利]一种木质纤维素衍生抑制剂耐受菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种木质纤维素衍生抑制剂耐受菌株的筛选方法，其特征在于，包括:以下步骤：

S1：准备：按照配方配制HS液体培养基，将木质纤维素水解液中的抑制剂成分配制成复合抑制剂，并对需要使用的装置进行处理；

S2：菌株准备：活化菌株，获得二级种子液；

S3：发酵：二级种子液30℃，静置发酵；

S4：梯度驯化：进行连续多轮梯度驯化；

S5：传代退化：对驯化后的菌株进行连续传代退化；

S6：测定：对退化后菌株木质纤维素水解液中抑制剂耐受性进行测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1中，HS液体培养基成分包括蛋白胨10g/L、酵母浸出粉7.5g/L、磷酸氢二钠10g/L、葡萄糖25g/L，调节pH为4.9-5.1，调节后于115℃环境中灭菌15min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1中，将木质纤维素水解液中的抑制剂成分配制成复合抑制剂，典型抑制剂成分包括糠醛、苯酚、乙酸，不限制于复合抑制剂且不限制于上述3种成分。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2中，将单菌落接种于5mlHS液体培养基30℃过夜培养获得一级种子液，转接部分一级种子液至30mlHS液体培养基，30℃培养48h获得二级种子液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S3中，转接部分二级种子液至30ml HS液体培养基，30℃静置发酵.获得细菌纤维素膜。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S4中，每个浓度进行多轮的驯化，每轮驯化至膜厚度生长至1-3mm结束。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，每轮驯化多组同时进行，选取其中产细菌纤维素膜速度较快的进行下一轮驯化。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S5中，将驯化后的菌株在HS液体培养基连续传代稳定耐受表型。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S6中，通过对木葡萄糖酸醋杆菌在规定时间内产细菌纤维素膜的量进行测定，并与原始菌株进行对比，来判断菌株耐受性的提升。