[发明专利]小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记及其应用在审
申请号: | 202211639381.9 | 申请日: | 2022-12-19 |
公开(公告)号: | CN115976263A | 公开(公告)日: | 2023-04-18 |
发明(设计)人: | 宿振起;贺茜;付真;刘继鲁;朱珍珍;倪中福;孙其信 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6858 |
代理公司: | 重庆信航知识产权代理有限公司 50218 | 代理人: | 孔垂烛 |
地址: | 100091 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 小麦 千粒重 qtl kasp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记,其特征在于,所述主效QTL定位于小麦3D染色体长臂上,命名为QTgw.cau-3D;所述QTgw.cau-3D包括两个连锁的KASP分子标记KASP.cau-3D.1和KASP.cau-3D.2,对应物理位置为3D:553,396,779-558,737,727,遗传距离为2.8cM;该千粒重QTL位点LOD值5.32~6.58,表型变异贡献率为9.03~11.86%,加性效应为1.26~1.82g;千粒重QTL位点的增效等位变异来自于亲本冀麦120。
2.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记,其特征在于,其正向引物1和正向引物2的5’末端分别连上FAM和HEX荧光基团接头;所述KASP分子标记KASP.cau-3D.1和KASP.cau-3D.2,具体引物序列分别如下:
①KASP.cau-3D.1的引物序列
正向引物1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGACAAGTGGGATGGGCTT-3’,如SEQ ID NO.1所示;
正向引物2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGACAAGTGGGATGGGCTC-3’,如SEQ ID NO.2所示;
共用反向引物:5’-TTCTTGCACCCGATCAACCA-3’,如SEQ ID NO.3所示;
②KASP.cau-3D.2的引物序列
正向引物1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTA-3’,如SEQ IDNO.4所示;
正向引物2:
5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTG-3’,如SEQ ID NO.5所示;
共用反向引物:5’-AGCGTTCAACGACTTTGGAA-3’,如SEQ ID NO.6所示。
3.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记,其特征在于,所述小麦千粒重主效QTL的基因分型方法,具体步骤如下:提取小麦基因组DNA,用序列SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的KASP.cau-3D.1标记的KASP引物或SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的KASP.cau-3D.2的KASP标记引物序列对提取的基因组DNA进行PCR扩增。
4.根据权利要求3所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记,其特征在于,所述PCR扩增方法为:
PCR反应体系:每孔DNA使用量为50-100ng,KASP引物混合物0.1μl,HiGeno 2×ProbeMix 4.0μl;无菌水补至8μl;
PCR反应程序:95℃预变性10min;95℃变性20s,61-55℃退火/延伸40s,其中,61-55℃梯度PCR,每循环降低-0.6℃,共10个循环;95℃变性20s,55℃退火/延伸40s,共28~34个循环;12℃保存;
KASP引物混合物包括:FAM正向引物、HEX正向引物、反向引物和无菌水;所述FMA正向引物浓度为12μmol/ml,所述HEX正向引物浓度为12μmol/ml,所述反向引物浓度为30μmol/ml。
5.权利要求1~4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在小麦高产育种中的应用。
6.权利要求1~4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在高千粒重小麦育种中的应用。
7.一种小麦千粒重高低检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1~4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记。
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