[发明专利]小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记及其应用

权利要求书

1.小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述主效QTL定位于小麦3D染色体长臂上，命名为QTgw.cau-3D；所述QTgw.cau-3D包括两个连锁的KASP分子标记KASP.cau-3D.1和KASP.cau-3D.2，对应物理位置为3D：553,396,779-558,737,727，遗传距离为2.8cM；该千粒重QTL位点LOD值5.32～6.58，表型变异贡献率为9.03～11.86％，加性效应为1.26～1.82g；千粒重QTL位点的增效等位变异来自于亲本冀麦120。

2.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，其正向引物1和正向引物2的5’末端分别连上FAM和HEX荧光基团接头；所述KASP分子标记KASP.cau-3D.1和KASP.cau-3D.2，具体引物序列分别如下：

①KASP.cau-3D.1的引物序列

正向引物1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGACAAGTGGGATGGGCTT-3’，如SEQ ID NO.1所示；

正向引物2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGACAAGTGGGATGGGCTC-3’，如SEQ ID NO.2所示；

共用反向引物：5’-TTCTTGCACCCGATCAACCA-3’，如SEQ ID NO.3所示；

②KASP.cau-3D.2的引物序列

正向引物1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTA-3’，如SEQ IDNO.4所示；

正向引物2：

5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCGATGGATGTTTCCCAAATTTG-3’，如SEQ ID NO.5所示；

共用反向引物：5’-AGCGTTCAACGACTTTGGAA-3’，如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求1所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述小麦千粒重主效QTL的基因分型方法，具体步骤如下：提取小麦基因组DNA，用序列SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的KASP.cau-3D.1标记的KASP引物或SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的KASP.cau-3D.2的KASP标记引物序列对提取的基因组DNA进行PCR扩增。

4.根据权利要求3所述的所述的小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记，其特征在于，所述PCR扩增方法为：

PCR反应体系：每孔DNA使用量为50-100ng，KASP引物混合物0.1μl，HiGeno 2×ProbeMix 4.0μl；无菌水补至8μl；

PCR反应程序：95℃预变性10min；95℃变性20s，61-55℃退火/延伸40s，其中，61-55℃梯度PCR，每循环降低-0.6℃，共10个循环；95℃变性20s，55℃退火/延伸40s，共28～34个循环；12℃保存；

KASP引物混合物包括：FAM正向引物、HEX正向引物、反向引物和无菌水；所述FMA正向引物浓度为12μmol/ml，所述HEX正向引物浓度为12μmol/ml，所述反向引物浓度为30μmol/ml。

5.权利要求1～4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在小麦高产育种中的应用。

6.权利要求1～4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记在高千粒重小麦育种中的应用。

7.一种小麦千粒重高低检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4中任一项所述小麦千粒重主效QTL的KASP分子标记。