[发明专利]一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体及其制备方法和应用，将LPS修饰到氯膦酸二钠脂质体的表面(LPS‑coupledclodronateliposomes；LPS‑CLD‑lipo)，使得这个脂质体能够有效的靶向肝脏中高表达TLR4的巨噬细胞和肝星状细胞进而杀伤清除细胞。本发明LPS修饰后的氯膦酸二钠脂质体在能够增强靶向巨噬细胞的基础之上增加靶向杀伤肝星状细胞的作用。此外，在肝纤维化模型中还证实了本发明具有良好的抗纤维化作用，可用于抑制肝纤维化。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，是关于一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

目前，市面上已经有市售的氯膦酸二钠脂质体(clodronate liposomes，CLD-lipo)，是一种有效的清除体内巨噬细胞的手段。原理是由于体内的单核吞噬系统(MPS)具有强大的吞噬、摄取外源性物质的特性，且80-90％的巨噬细胞是存在于肝脏中的。因此在体内实验中给予氯膦酸二钠脂质体后由于被动靶向的作用，因此可以聚集到肝脏进而清除巨噬细胞。在巨噬细胞溶酶体的作用下，脂质体被破坏，释放出的氯膦酸二钠在细胞内代谢成不可水解的ATP类似物，抑制线粒体中的ADP/ATP转运机制，从而阻断线粒体呼吸链诱导细胞凋亡。

中国专利CN103040863A，公开日：2012.12.17，公开了一种氯膦酸二钠脂质体注射剂及其制法。通过选用特定重量配比的氯膦酸二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚氧乙烯40氢化蓖麻油制成品质优异的氯膦酸二钠脂质体注射剂。中文专利CN107854489A，公开日：2018.03.30，公开了氯膦酸二钠脂质体在肿瘤阿霉素化疗辅助治疗方面的用途，将适量的胆固醇、卵磷脂置于混合后，加入氯仿-甲醇混合液，采用旋转薄膜蒸发法制备均匀的脂质干膜，再加入氯膦酸二钠的磷酸缓冲液即得，发现制备稳定高效的氯膦酸二钠脂质可减弱阿霉素引起的心肌毒性且增加阿霉素对乳腺癌的治疗效果。有研究还发现，当肝脏受到损伤刺激时，巨噬细胞和肝星状细胞表面均高表达Toll-like receptor4(TLR4)，TLR4主要识别革兰氏阴性菌的膜成分-脂多糖(LPS)，并且TLR4是LPS特异性结合的受体。本发明在此基础上进一步对氯膦酸二钠脂质体进行改造，将LPS修饰到氯膦酸二钠脂质体的表面(LPS-coupled clodronate liposomes；LPS-CLD-lipo)，使得这个脂质体能够有效的靶向肝脏中高表达TLR4的巨噬细胞和肝星状细胞进而杀伤清除细胞。LPS修饰后的氯膦酸二钠脂质体在能够增强靶向巨噬细胞的基础之上，还增加了靶向杀伤肝星状细胞的作用。

而目前关于本发明中利用LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体及其制备方法和应用还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体的制备方法。

本发明的第二个目的是，提供一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体。

本发明的第三个目的是，提供一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种LPS修饰的氯膦酸二钠脂质体的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：

a)配制含氯仿，甲醇和ddH2O的混合溶剂；

b)成膜：将水溶后的脂多糖，卵膦脂和胆固醇加分别与步骤a)中的混合溶剂混合均匀后放入旋蒸瓶，真空旋转60min；

c)水化：将氯膦酸二钠+10mL ddH2O溶解后放入旋蒸瓶，室温旋转20min；

d)吸出水化后的溶液，放入避光管中室温静置2h后，混匀后超声3min；

e)4℃静置过夜，离心60min，移除白色条带下的氯膦酸二钠溶液；