[发明专利]一种基于CRISPR/cas12a的B族链球菌快速检测体系及方法

权利要求书

1.一种用于检测GBS核酸分子的检测体系，其特征在于，所述检测体系包含：

(a)Cas12a蛋白；

(b)向导RNA，所述向导RNA引导Cas12a蛋白特异性结合于GBS核酸分子；和

(c)核酸探针，所述核酸探针为单链DNA；

其中，所述的GBS核酸分子为DNA分子。

2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述检测体系还含有：

(e1)用于扩增GBS核酸分子的聚合酶；

(e2)任选的用于反转录的反转录酶；

(e3)用于扩增反应和/或反转录反应的dNTP。

3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的向导RNA的长度为30-50nt，较佳地35-45nt，更佳地41nt。

4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的向导RNA具有选自下组的序列：如SEQ ID NO:7所示的序列、如SEQ ID NO:8所示的序列，或其组合。

5.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的单链DNA为在5'端标记荧光基团FAM并在3'端标记淬灭基团BHQ1后的荧光探针。

6.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的核酸探针为在5'端标记FAM并在3'端标记Biotin后的分子探针。

7.一种用于检测GBS核酸分子的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

i)第一容器以及位于第一容器内的Cas12a蛋白；

ii)任选的第二容器以及位于第二容器内的向导RNA，所述向导RNA引导所述Cas12a蛋白特异性结合于GBS核酸分子；

iii)第三容器以及位于第三容器内的核酸探针；

iv)任选的第四容器以及位于第四容器内的缓冲液；

其中，所述的GBS核酸分子为DNA分子。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还含有用于LAMP反应的试剂，其中所述的用于LAMP反应的试剂包括LAMP引物，并且所述LAMP引物具有选自下组的序列：

如SEQ ID NO:9所示的序列、如SEQ ID NO:10所示的序列、如SEQ ID NO:11所示的序列、如SEQ ID NO:12所示的序列、如SEQ ID NO:13所示的序列、如SEQ ID NO:14所示的序列、如SEQ ID NO:15所示的序列、如SEQ ID NO:16所示的序列，或其组合。

9.一种检测样本中是否存在GBS核酸分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(i)提供如权利要求1所述的用于检测GBS核酸分子的检测体系，并且所述的检测体系还含有待检测的样本；和

(ii)检测所述检测体系中的核酸探针是否被Cas12a蛋白进行切割，所述的切割为旁路单链DNA的反式切割；

其中，所述核酸探针被Cas12a蛋白切割，则表示所述样本中存在GBS核酸分子；而所述核酸探针不被Cas12a蛋白切割，则表示所述样本中不存在GBS核酸分子。

10.一种检测样本中是否存在GBS核酸分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(i)提供一检测体系，所述检测体系包括：

(a)Cas12a蛋白；

(b)向导RNA，所述向导RNA引导Cas12a蛋白特异性结合于GBS核酸分子；

(c)核酸探针，所述核酸探针为单链DNA；

其中，所述的GBS核酸分子为DNA分子；

(d)缓冲液；

(e1)用于扩增靶标DNA的聚合酶；

(e2)任选的用于反转录的反转录酶；

(e3)用于扩增反应和/或反转录反应的dNTP；和

(f)待检测的检测样本；

(ii)对所述检测体系进行反转录和/或扩增反应，从而获得经反转录和/或经扩增的检测体系；

(iii)检测上一步骤中的所述检测体系中的核酸探针是否被Cas12a蛋白进行切割，所述的切割为旁路单链DNA的反式切割；

其中，所述核酸探针被Cas12a蛋白切割，则表示所述样本中存在GBS核酸分子；而所述核酸探针不被Cas12a蛋白切割，则表示所述样本中不存在GBS核酸分子。