[发明专利]检测脑组织中tRF表达引物在制备甲基苯丙胺成瘾辅助诊断试剂盒的应用

说明书

本发明涉及一种检测组织中tRF表达引物在制备甲基苯丙胺成瘾辅助诊断试剂盒的应用，其特征在于：该tRF‑1_32‑Gly‑GCC‑2‑M2的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述tRF‑1_32‑Gly‑GCC‑2‑M2在甲基苯丙胺成瘾大鼠组织中的特异性表达下调：所述引物为：F1：5’GATCGCATGGGTGGTTCAGT 3'；R1：5’CTCTTCCGATCTAGGCGAGAAT 3’，与现有技术相比，本发明的优点在于甲基苯丙胺成瘾大鼠组织中的特异性表达下调tRF‑1_32‑Gly‑GCC‑2‑M2可作为甲基苯丙胺成瘾诊断的新型分子标记物。

技术领域

本发明涉及一种甲基苯丙胺成瘾大鼠脑组织中tRNA衍生片段的检测方法，尤其涉及一种荧光染料法实时定量逆转录-聚合酶链式反应检测甲基苯丙胺成瘾大鼠脑组织中tsRNA的方法及其应用。

背景技术

近几年，甲基苯丙胺是我国滥用人数最多的毒品。吸毒造成药物依赖者劳动能力下降或者丧失，家庭经济遭受损失，诱发犯罪，而且增加HIV的传播机会，给社会带来严重的不稳定因素，阻碍社会进步和经济发展。至今，关于海洛因依赖治疗方法已比较成熟，主要有美沙酮和丁丙诺啡维持治疗等，均得到很好的广泛应用(Schuckit，2016；Townsend etal，2021)。而治疗Meth依赖的临床试验前景一直不容乐观，迄今尚无令人信服的理想治疗方案(et al，2017；Siefried et al，2020)。生物标志物研发可能是实现药物成瘾诊断、治疗以及防复吸的重要手段之一，而目前尤其甲基苯丙胺的生物标志物的研究仍比较匮乏。能够用于指导临床的成熟生物标志物较少，寻找新的稳定可靠的甲基苯丙胺成瘾相关的生物标志物仍然是药物成瘾研究中亟待解决的问题。因此对甲基苯丙胺的生物标志物研究，不仅可发现相关疾病的分子诊断和治疗的标志物，并有助于加深理解甲基苯丙胺所致的复杂性精神疾病的发病机制，甚至有潜力成为上述疾病的新治疗靶点。

随着分子生物学技术的快速发展，最近的研究已揭示，转运RNA(tRNA)来源的小RNA(tsRNA)在转录或转录后可调控基因表达，并在许多人类疾病的发生发展过程有着重要功能而使其成为生物标志物研究的新热点。tRNA可以被切割裂解成长度为18-40个核苷酸的异质ncRNA群，称为tRNA来源的小RNA(tsRNA)。基于它们的长度和切割位点的数量，tsRNA可分为2种主要类型：tRNA衍生的片段(tRF)和tRNA衍生的应激诱导的RNA(tiRNA)。基于其有多种核苷酸修饰而结构比较稳定。这些RNA最初被认为是tRNA随机切割的副产物。越来越多的证据表明tsRNA在各种疾病(包括精神神经疾病)病理过程中的广泛参与，为人们尝试开发基于tsRNA的生物标志物成为可能(Shenet al，2018)。它们既是细胞缺氧、中毒、氧化等应激反应的信号分子，又是基因表达的重要调节因子，这些特点使得tsRNA在疾病诊断与治疗方法的开发应用上具有广阔的前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种检测组织中表达tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2的引物在制备甲基苯丙胺成瘾辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该检测组织中tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2表达的引物在制备甲基苯丙胺成瘾辅助诊断试剂盒中的应用，其特征在于：该tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述tRF-1_32-Gly-GCC-2-M2在甲基苯丙胺成瘾大鼠脑组织中的特异性表达下调：

所述引物为：

F1：5’GATCGCATGGGTGGTTCAGT 3'；

R1：5’CTCTTCCGATCTAGGCGAGAAT 3’。

进一步地，所述试剂盒还包括有外参基因U6的特异性扩增上下游引物：

F2：5’GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT 3’