[发明专利]猪HAT1基因修饰系统及应用

说明书

本发明提供一种猪HAT1基因修饰系统及应用。本发明提供用于猪HATl基因修饰的系统，该系统中含有的第一载体、第二载体可以表达基因编辑工具蛋白和sgRNA，对HAT1基因的两个靶位点进行有效酶切，利用供体DNA的修饰片段替换为靶位的待修饰片段，实现HAT1基因精准修饰。为研究HAT1基因功能提供精准细胞和动物模型。

技术领域

本发明涉及基因编辑技术领域，具体地说，涉及一种猪HAT1基因修饰系统及应用。

背景技术

HAT1基因能够调控多种组蛋白和非组蛋白乙酰化，具有重要的表观遗传修饰调控功能，参与染色质重塑、基因转录激活、DNA复制及损伤修复、胚胎发育、核重编程等生物学过程。前期研究表明，HAT1基因表达量与猪克隆胚胎发育潜力密切相关，HAT1高表达的猪克隆胚胎的发育潜力更高。因此，构建HAT1基因修饰细胞或者动物模型对深入解析HAT1基因功能，促进猪克隆胚胎发育潜力具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪HAT1基因修饰系统及应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种靶向猪HAT1基因的CRISPR/Cas载体，其sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和/或2所示。

优选地，其sgRNA作用位点的核苷酸序列选自SEQ ID NO：1和2的组合。

其中，猪HAT1基因在GenBank上的登录号为100622317。

第二方面，本发明提供一种猪HAT1基因修饰系统，包含所述的CRISPR/Cas载体以及供体DNA。

其中，所述供体DNA含有猪HAT1基因第6外显子修饰片段，所述修饰片段编码的氨基酸序列包含猪HAT1蛋白第188位氨基酸由T到A的突变。

进一步地，所述CRISPR/Cas载体包含基因编辑蛋白表达盒和sgRNA表达盒。

所述基因编辑蛋白可选自Cas9、Cas9n、Cpf1或C2c2等，优选Cas9。

所述CRISPR/Cas载体的骨架载体可选自pX330、pX260、pX334、pX335、pX458、pX459、pX461、pX462、pX551或pX552等，优选pX458。

优选地，所述供体DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

第三方面，本发明提供所述猪HAT1基因修饰系统的以下任一应用：

(a)构建HAT1基因修饰的细胞系；

(b)构建HAT1基因修饰的猪模型。

第四方面，本发明提供猪HAT1基因修饰细胞的制备方法，包括向目的细胞中导入所述猪HAT1基因修饰系统，得到HAT1基因修饰的细胞。

优选地，所述目的细胞为猪成纤维细胞，更优选猪胎儿成纤维细胞；

优选地，导入的方法包括电穿孔法或脂质体转染法。

优选地，导入操作后通过筛选和鉴定，得到猪HAT1基因修饰的细胞。

优选地，所述筛选包括通过流式分选筛选单克隆细胞。

优选地，所述鉴定包括测序鉴定。

第五方面，本发明提供按照所述方法制备得到的猪HAT1基因修饰细胞。

第六方面，本发明提供HAT1基因修饰的基因编辑猪的制备方法，将所述猪HAT1基因修饰细胞移植入去核的猪卵母细胞，得到重组克隆胚胎，将所述重组克隆胚胎移植入母猪体内经妊娠，得到HAT1基因修饰的基因编辑猪。