[发明专利]用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物及其应用

权利要求书

1.用于制备熊去氧胆酸及其衍生物的组合物，其特征在于，包括氧化反应酶组合和还原反应酶组合；

所述氧化反应酶组合包括NAD氧化酶、7-α羟基类固醇脱氢酶及辅酶；

所述还原反应酶组合包括醇脱氢酶与7-β羟基类固醇脱氢酶及辅酶；所述辅酶为NAD⁺或NADP⁺。

2.如权利要求1所述组合物，其特征在于，所述氧化反应酶组合中，所述NAD氧化酶、7-α羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为NAD氧化酶：7-α羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克；

所述还原反应酶组合中，所述醇脱氢酶与7-β羟基类固醇脱氢酶及辅酶的比例为醇脱氢酶：7-β羟基类固醇脱氢酶：辅酶＝100～500单位酶活：100～500单位酶活：0.5～5毫克。

3.如权利要求1所述组合物在制备熊去氧胆酸及其衍生物的用途，其特征在于，所述组合物用于将鹅去氧胆酸及其衍生物及转化为熊去氧胆酸及其衍生物；所述鹅去氧胆酸衍生物包括牛磺鹅去氧胆酸，所述熊去氧胆酸衍生物包括牛磺熊去氧胆酸。

4.一种制备熊去氧胆酸及其衍生物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、将原料加入如权利要求1所述的氧化反应酶组合中，通入空气，进行氧化反应；

(2)、升温使步骤(1)中的氧化反应酶组合失去活性，降温；

(3)、加入如权利要求1所述的还原反应酶组合和异丙醇，进行还原反应；

所述步骤(1)的原料包括鹅去氧胆酸、鹅去氧胆酸衍生物、含有鹅去氧胆酸的复合物、含有鹅去氧胆酸衍生物的复合物的至少一种。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括步骤(4)：升温使反应体系中的酶变性，降温过滤，除去固形物。

6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)和步骤(4)中所述的酶变性温度为50～100℃；优选地，为70～90℃。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括步骤(5)：通过减压蒸馏，真空干燥得到块状固体，再经过机械粉粹得到粉末状的产物。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的反应条件为：25～35℃，pH6.0～8，反应2～3小时；所述步骤(3)的反应条件为：20～35℃，pH6.0～8，反应2～4小时。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述原料为禽胆汁；以禽胆汁为原料时，还包括预处理过程，预处理步骤如下：鸡胆破皮后除去胆皮，取胆汁升温水解，降温过滤，除去固形物，得到澄清的鸡胆汁。

10.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述鹅去氧胆酸衍生物为牛磺鹅去氧胆酸；所述牛磺鹅去氧胆酸与所述步骤(1)中的辅酶的质量比为鹅去氧胆酸及其衍生物：辅酶＝1g：0.5～5mg；所述步骤(3)中，异丙醇用量为0.2～1.5毫升每克牛磺鹅去氧胆酸。