[发明专利]减毒多杀性巴氏杆菌及其构建方法和应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及减毒多杀性巴氏杆菌及其构建方法和应用，减毒多杀性巴氏杆菌缺失多杀性巴氏杆菌的arcA基因和gatA基因，多杀性巴氏杆菌的arcA基因的基因编号为A0R64_00400。本发明构建的arcA、gatA双基因突变株，在鸭上高度减毒并具备一定的体内定殖水平，具备减毒活疫苗潜力。口服免疫该突变株不影响鸭群的生产性能，并能提供针对多杀性巴氏杆菌致死剂量攻毒的免疫保护。本发明为研制多杀性巴氏杆菌或其他细菌的减毒活疫苗提供了新策略。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及减毒多杀性巴氏杆菌及其构建方法和应用。

背景技术

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是一种重要的畜禽病原菌，隶属于巴氏杆菌科、巴氏杆菌属多杀亚种。它的宿主谱广泛，可引起多种动物如鸭、鸡、牛、猪的接触性传染病，在禽类上表现为禽霍乱。根据其脂多糖(LPS)外核心寡糖基因簇可分为8种LPS型(L1-L8)，引发禽霍乱的多为L1型。禽霍乱在鸡、鸭、鹅等禽类中的具有高发病率和高死亡率的特点，给我国养禽业造成巨大的经济损失。长期以来，我国针对禽霍乱的治疗主要依赖于抗生素，但随着抗生素耐药和残留问题日趋严重，发展安全、高效的禽霍乱疫苗成为疾病防控的迫切需求。目前预防该病的商品化疫苗主要为油乳剂灭活疫苗，然而其存在免疫剂量大、副作用明显、交叉保护力弱等缺陷。基因工程减毒活疫苗具有基因背景明确、可口服或滴鼻、诱导均衡免疫反应、交叉保护力强等优势，是理想的疫苗形式。

筛选合适的毒力基因是构建基因工程减毒活疫苗的前提。细菌入侵机体后会遭遇多种极端环境，如氧化应激、缺铁、缺氧、低酸等，适应这些变化对细菌生存十分重要。研究发现，与细菌适应极端环境相关的调控因子往往与细菌毒力密切相关。基于大肠杆菌、流感嗜血杆菌等革兰氏阴性菌的研究证实，全局调控因子ArcA(Aerobic respiratorycontrol)在多种细菌适应有氧、无氧环境及其转换中发挥重要作用，在部分细菌中其与毒力有一定影响；然而此基因及其功能在多杀性巴氏杆菌中仍是未知的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种减毒多杀性巴氏杆菌及其构建方法和应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：减毒多杀性巴氏杆菌，所述减毒多杀性巴氏杆菌缺失多杀性巴氏杆菌的arcA基因和gatA基因，多杀性巴氏杆菌的arcA基因的基因编号为A0R64_00400，所述A0R64_00400的序列如下：

ATGGGAACGCCACAAATTTTAATTGTTGAAGACGAAGCAATCACCAGAAATACCTT

AAAAAGTATTTTTGAGGCGGAGGGTTATGAAGTATTTGAGGCGGCAGACGGCGCACAGA

TGCACCGTATTCTGTCTAATAAAGTGATTAATCTTGTCATTATGGATATCAACTTACCCGGT

AAGAATGGACTCATGCTCGCCCGCGAACTACGAGAAACGACCAATACCGCATTAATGTT

TTTAACTGGTCGCGATAATGAAGTGGATAAAATTCTTGGTCTAGAAATCGGTGCGGATGA

TTACATCACAAAACCATTCAATCCAAGAGAATTAACCATTCGTGCACGAAATTTATTACA

ACGCACGATGCAAGAAAATAGTAAAGATAGCCATCATCCTATTGAGCAATATCGCTTTAA

TGGCTGGACACTAGACTTAAATAGCCGCACGTTAATTAATCCAGAAGGGGAAGAATATA

AACTTCCACGCAGTGAATTCCGTGCGATGTTACATTTCTGTGAAAACCCGGGCAAAATT