[发明专利]多杀性巴氏杆菌arcA基因及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及多杀性巴氏杆菌arcA基因及其应用，所述多杀性巴氏杆菌的arcA基因的基因编号为A0R64_00400，所述A0R64_00400的序列如SEQ IDNO：1所示。本发明首次筛选得出了多杀性巴氏杆菌的arcA基因同源物，发现其编码序列与其他细菌的ArcA具有较高的同源性，并通过自杀质粒介导的同源重组法构建菌株，在鸭模型上证实该缺失株高度减毒，证实A0R64_00400为多杀性巴氏杆菌的arcA基因，也为毒力基因。本发明构建的arcA、gatA双基因突变株，在鸭上高度减毒并具备一定的体内定殖水平，且不影响鸭群的生产性能，具备减毒活疫苗潜力。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及多杀性巴氏杆菌arcA基因及其应用。

背景技术

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是一种重要的畜禽病原菌，隶属于巴氏杆菌科、巴氏杆菌属多杀亚种。它的宿主谱广泛，可引起多种动物如鸭、鸡、牛、猪的接触性传染病，在禽类上表现为禽霍乱。根据其脂多糖(LPS)外核心寡糖基因簇可分为8种LPS型(L1-L8)，引发禽霍乱的多为L1型。目前预防该病的商品化疫苗主要为油乳剂灭活疫苗，然而其存在免疫剂量大、副作用明显、交叉保护力弱等缺陷。基因工程减毒活疫苗具有基因背景明确、可口服或滴鼻、诱导均衡免疫反应、交叉保护力强等优势，是理想的疫苗形式。

筛选合适的毒力基因是构建基因工程减毒活疫苗的前提。细菌入侵机体后会遭遇多种极端环境，如氧化应激、缺铁、缺氧、低酸等，适应这些变化对细菌生存十分重要。研究发现，与细菌适应极端环境相关的调控因子往往与细菌毒力密切相关。基于大肠杆菌、流感嗜血杆菌等革兰氏阴性菌的研究证实，全局调控因子ArcA(Aerobic respiratorycontrol)在多种细菌适应有氧、无氧环境及其转换中发挥重要作用，在部分细菌中其与毒力有一定影响；然而此基因及其功能在多杀性巴氏杆菌中仍是未知的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种多杀性巴氏杆菌arcA基因及其应用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：多杀性巴氏杆菌的arcA基因，所述多杀性巴氏杆菌的arcA基因的基因编号为A0R64_00400，所述A0R64_00400的序列如下：

ATGGGAACGCCACAAATTTTAATTGTTGAAGACGAAGCAATCACCAGAAATACCTTAAAAAGTATTTTTGAGGCGGAGGGTTATGAAGTATTTGAGGCGGCAGACGGCGCACAGATGCACCGTATTCTGTCTAATAAAGTGATTAATCTTGTCATTATGGATATCAACTTACCCGGTAAGAATGGACTCATGCTCGCCCGCGAACTACGAGAAACGACCAATACCGCATTAATGTTTTTAACTGGTCGCGATAATGAAGTGGATAAAATTCTTGGTCTAGAAATCGGTGCGGATGATTACATCACAAAACCATTCAATCCAAGAGAATTAACCATTCGTGCACGAAATTTATTACAACGCACGATGCAAGAAAATAGTAAAGATAGCCATCATCCTATTGAGCAATATCGCTTTAATGGCTGGACACTAGACTTAAATAGCCGCACGTTAATTAATCCAGAAGGGGAAGAATATAAACTTCCACGCAGTGAATTCCGTGCGATGTTACATTTCTGTGAAAACCCGGGCAAAATTCAAACCCGTGAAGAATTATTGAAGAAAATGACGGGACGTGAATTAAAGCCACAAGATCGGACAGTAGATGTCACTATTCGTCGTATTCGTAAACATTTTGAAGATCATCCAGAAACCCCAGAGATTATCGCCACGATCCATGGTGAAGGTTATCGTTTCTGTGGTGAATTAGAATAA