[发明专利]一种鉴定忍冬品种的SNP位点组合、引物组合和鉴定忍冬品种的方法

权利要求书

1.一种鉴定忍冬品种的SNP位点组合，其特征在于，所述SNP位点前后150bp的核苷酸序列如SEQ ID No.1～15所示。

2.一种扩增权利要求1所述SNP位点组合的引物组合，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID No.16～45所示。

3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，SEQ ID No.16～17扩增SEQ ID No.1；

SEQ ID No.18～19扩增SEQ ID No.2；

SEQ ID No.20～21扩增SEQ ID No.3；

SEQ ID No.22～23扩增SEQ ID No.4；

SEQ ID No.24～25扩增SEQ ID No.5；

SEQ ID No.26～27扩增SEQ ID No.6；

SEQ ID No.28～29扩增SEQ ID No.7；

SEQ ID No.30～31扩增SEQ ID No.8；

SEQ ID No.32～33扩增SEQ ID No.9；

SEQ ID No.34～35扩增SEQ ID No.10；

SEQ ID No.36～37扩增SEQ ID No.11；

SEQ ID No.38～39扩增SEQ ID No.12；

SEQ ID No.40～41扩增SEQ ID No.13；

SEQ ID No.42～43扩增SEQ ID No.14；

SEQ ID No.44～45扩增SEQ ID No.15。

4.一种鉴定忍冬品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待检样品的DNA，以所述DNA为模板，使用权利要求2或3所述的引物组合进行PCR扩增，得到扩增产物；

2)将所述步骤1)得到的扩增产物进行Sanger测序，得到待检样品在权利要求1所述SNP位点上的基因型，绘制DNA指纹图谱；

3)将所述步骤2)得到的DNA指纹图谱与已构建好的忍冬DNA指纹库进行比对，当待检样品与忍冬DNA指纹库中差异位点＝0时，为“相同品种”；当待检样品与忍冬DNA指纹库中差异位点≤2时，为“近似品种”；当待检样品与忍冬DNA指纹库中差异位点≥3时，为“差异品种”。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤1)PCR扩增的体系为：模板DNA1μl，浓度为10μM上游引物1μl，浓度为10μM下游引物1μl，Dntp(mix)1μl，TaqBuffer2.5μl，Taq酶0.2μl，用灭菌去离子水补齐到25μl。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，63℃退火30s，每循环退火温度降0.5℃，72℃延伸30s，10个循环；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环后；72℃修复延伸10min。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤3)已构建好的忍冬DNA指纹库使用39个忍冬品种采用常规方法构建得到。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述39个忍冬品种为：封花1号、鲁峰王、巨花1号、亚特1号、亚特立本金银花、密县线花、密县野生、密县大毛花、豫金1号、豫金2号、特蕾1号、封金1号、豫金4号、豫金5号、密花3号、密花2号、密花1号、豫金3号、金翠蕾、白云、龙花、龙瑶、华金2号、华金3号、华金6号、豫金6号、豫金5号1-2、九丰1号、野生线花、长针线花、小鸡爪、大鸡爪、细针观花、亚特良种、亚特5号、亚特4号、丰蕾和淡红金银花。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，提取待检样品的幼嫩叶片的DNA。