[发明专利]一种CHO细胞株、纤维蛋白原降解产物FDP抗体及其应用

权利要求书

1.一种CHO细胞株，其特征在于，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202204，其稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。

2.权利要求1所述CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体，其特征在于，所述纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。

4.权利要求2所述纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株

采用天然FDP蛋白对BALB/c小鼠进行多次免疫，制备其脾细胞悬液和SP2/0细胞融合，筛选能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

步骤2：单克隆抗体序列的获得

提取杂交瘤细胞的RNA，通过RT-PCR方法获得FDP单克隆抗体DNA序列，即抗体轻链和重链可变区DNA的序列，并对扩增后的DNA序列进行测序；

步骤3：单克隆抗体序列的构建

将测序获得的轻链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgK保守区的DNA序列，即获得改造后的抗体轻链序列，测序获得的重链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgG1保守区DNA序列，即获得改造后的抗体重链序列；

步骤4：单克隆抗体的表达

利用基因工程技术构建抗体轻链和重链表达载体；将载体转染进入CHO细胞系，稳定表达纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体。

5.据权利要求4所述的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤2中，引物序列：

5’端引物序列：ATTGT CCTTA ATGGG GGG

轻链混合引物：

5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）

5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）

5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）

重链混合引物：

5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’（IgG1保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2a保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’（IgG2b保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’（IgG3保守区5’端反向引物）。

6.据权利要求4所述的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，与骨髓瘤细胞的融合的脾脏细胞为末次免疫后第三天取脾制成的细胞悬，其骨髓瘤细胞的混合比例为1：6到1：10。

7.根据权利要求3所述的CHO细胞株分泌产生的纤维蛋白原降解产物FDP单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含FDP单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。