[发明专利]一组穿心莲内酯合成相关P450细胞色素酶及其应用在审
| 申请号： | 202211669385.1 | 申请日： | 2022-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN115851637A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 周景文;李珊;高松;徐沙;曾伟主;余世琴 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/42;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一组 穿心莲 内酯 合成 相关 p450 细胞 色素 及其 应用 | ||
1.穿心莲来源的CYP450酶在催化合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid中的应用；所述穿心莲来源的CYP450酶为CYP71A8和CYP71D10。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CYP71A8的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CYP71D10的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CYP71A8的N端截短32位氨基酸，所述CYP71D10的N端截短28位氨基酸。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，N端截短32位氨基酸的CYP71A8的氨基酸序列如SEQ ID NO.3，N端截短28位氨基酸的CYP71D10的氨基酸序列如SEQ ID NO.4中所示。
5.一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母敲除基因组上的ROX1、GAL80基因；整合表达GGPP合酶编码基因、CPS二萜合酶编码基因；游离表达N端截短32位氨基酸的CYP71A8编码基因CYP71A8t、N端截短28位氨基酸的CYP71D10编码基因CYP71D10t和CPR编码基因ApCPR。
6.根据权利要求2所述的重组酿酒酵母，其特征在于，敲除ROX1位点后，在ROX1位点整合GGPP合酶编码基因和CPS二萜合酶编码基因。
7.一种全细胞催化剂，其特征在于，所述全细胞催化剂包含权利要求5或6所述的重组酿酒酵母。
8.一种合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid的方法，所述方法为以权利要求5或6所述的重组酿酒酵母或权利要求7所述的全细胞催化剂为发酵菌株，发酵生产3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid。
9.穿心莲来源的CYP450酶、或权利要求5或6所述重组酿酒酵母、或权利要求7所述全细胞催化剂、或权利要求8所述方法在催化合成穿心莲内酯或含有穿心莲内酯的产品中的应用。
10.权利要求5或6所述重组酿酒酵母、或权利要求7所述全细胞催化剂、或权利要求8所述方法在催化合成3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid或含有3,15,19-Trihydroxy-8(17),13-ent-labdadiene-16-oic acid的产品中的应用。
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