[发明专利]检测猫白血病病毒的试剂盒、引物组、探针、检测方法

说明书

本发明提供了一种检测猫白血病病毒的试剂盒、引物组、探针、检测方法。本发明的猫白血病病毒检测用引物组，包括正向引物、反向引物，正向引物、反向引物之间以及正向引物、反向引物与其它病毒之间无交叉反应，利用本申请的引物组检测猫白血病病毒具有良好的特异性、灵敏度高以及检测结果可靠等优点；本发明的试剂盒包括引物组和探针，该试剂盒可用于检测猫白血病病毒，该试剂盒具有特异性高、重复性好、灵敏度高、检测结果可靠等优点；采用本发明的试剂盒对猫白血病病毒的检测，所达到的最低检测限超过现有现有技术中检测FeLV的最高水平，本试剂盒检测灵敏度可达500copies/μL以下。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种检测猫白血病病毒的试剂盒、引物组、探针、检测方法。

背景技术

猫白血病病毒(feline leukemia virus，FeLV)属于逆转录病毒科C型肿瘤病毒属，为有囊膜的单链RNA病毒。FeLV可在家猫中流行，引起组织细胞增殖、蜕变和免疫抑制。FeLV感染虽然无性别和品种差异，但不同年龄猫易感性不同，新生仔猫最易感，4月龄以上猫感染率相对较低，FeLV感染猫90％以上终身带毒。FeLV主要经呼吸道和消化道传播，在口、鼻分泌物中含量最高；另外，在患病猫尿液和乳汁中可检测到病毒，故猫呼吸理毛行为、共用食槽和饮水槽可相互传染本病毒；FeLV也可经胎盘垂直传播，常在被感染动物出现造血系统肿瘤之前，导致孕猫流产或新生猫致死性侏儒症。目前实验室诊断FeLV的方法有：病毒分离鉴定、免疫层析、免疫荧光、PCR、ELISA等。其中临床常用的检测方法为RT-PCR。PCR技术因特异性强、费用低等优点已成为一种经典的检测方法，广泛用于猫白血病病毒的检测。

但目前的FeLV检测灵敏度较低，基于此，有必要对现有的FeLV检测进行改进。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种检测猫白血病病毒的试剂盒、引物组、探针、检测方法，以解决或部分解决现有技术中存在的问题。

第一方面，本发明提供了一种猫白血病病毒检测用引物组，所述引物组包括正向引物和反向引物；

其中，所述正向引物的核酸序列为5’-AGTTCGACCTTCCGCCTCAT-3’；

所述反向引物的核酸引物序列为5’-AGAAAGCGCGCGTACAGAAG-3’。

第二方面，本发明还提供了一种与所述引物组配合使用的探针，所述探针的核酸序列为5’-TAAACTAACCAATCCCCATGQCCTCTCGC-3’。

优选的是，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，所述探针的3’端标记有荧光淬灭基团。

优选的是，所述荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED、LCRED460中的一种；

和/或，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。

第三方面，本发明还提供了一种检测猫白血病病毒的试剂盒，包括所述的引物组以及所述的探针。

优选的是，所述的试剂盒，还包括MgCl₂、Tris、BSA和dNTPs。

优选的是，所述的试剂盒，包括1～3mM MgCl₂、40～60mM Tris、450～550mg/LBSA、90～110μM dNTPs、0.05～0.2μM正向引物、0.05～0.2μM正向引物、0.05～0.2μM探针。

优选的是，所述的试剂盒，还包括酶混合液，所述酶混合液包括RNA酶抑制剂、逆转录酶、Taq酶。

第四方面，本发明还提供了一所述的试剂盒在制备猫白血病病毒检测试剂中的应用。