[发明专利]一种大米抗热肽剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种大米抗热肽剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

活化菌种：将地衣芽孢杆菌BTJQ4接种于马铃薯葡萄糖肉汤培养基，所述地衣芽孢杆菌BTJQ4的保藏编号为CCTCCNO：M2020892，接种于马铃薯葡萄糖肉汤培养基在45℃下以转速180rpm进行摇床培养18-24h，得到活化后的菌种；

制备固体培养基：以质量份数计，将大米蛋白和麸皮以3:1混合均匀后进行高压灭菌，调整pH值为6-7，得到固体培养基；

制备发酵培养基：以所述固体培养基的质量百分数计，将大米蛋白5-7％，K₂HPO₄0.3-0.8％，NaH₂PO₄0.3-0.5％混合均匀，调整pH值为7-8，进行高压灭菌，得到发酵培养基；

制备固体菌剂：将所述活化后的菌种接种于所述固体培养基，混合均匀后低速搅动培养，以pH值为6.5的磷酸缓冲液进行喷淋，保持所述固体培养基的湿度为45-55％，于45℃下培养48h，得到第一固体菌剂，

制备大米抗热肽剂：将所述第一固体菌剂接种于所述发酵培养基，在45℃下以转速180rpm转动培养24h，升温至50℃，加入蛋白酶水解，灭酶后离心，收集上清液并冻干，得到所述大米抗热肽剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备固体培养基步骤中，调整pH值为6.5，保持所述含水率为45-55％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述摇床培养至生物量达10⁸CFU/mL以上得到所述活化后的菌种。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述高压灭菌为在121℃高压灭菌20min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，用量为50U/ml。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述灭酶后以10000r/min离心15min。

7.一种大米抗热肽剂，其特征在于，采用权利要求1-6中任一制备方法制备得到。

8.采用权利要求7所述的大米抗热肽剂进行乳酸菌热保护的方法，其特征在于，包括以下步骤：

活化乳酸菌；

制备处于对数生长中期的乳酸菌，将所述活化乳酸菌以1％接种至20mL灭菌MRS肉汤培养基，接种后1％活化乳酸菌的起始OD600大约为0.1，置于30℃静置培养4h15min，达到对数生长中期，所述对数生长中期的MRS肉汤培养基OD600约为1；

制备乳酸菌悬液：将所述扩培后的乳酸菌于4℃离心10min收集菌体，水洗并再次离心，重复多次，以无菌水混匀后，得到乳酸菌悬液；

热激逆境：将所述乳酸菌悬液与所述大米抗热肽剂以体积比为1:9进行混合并置于50℃环境下热激20min。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述大米抗热肽剂的质量浓度为0.25mg/mL。