[发明专利]Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法

说明书

本发明涉及非人灵长类实验动物AD疾病造模技术领域，具体公开了Aβ42‑hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，使用Aβ42‑hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物的双侧脑实质内诱导阿尔茨海默病模型。所述Aβ42‑hIAPP共寡聚化物由可溶性β‑淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。通过采用本方法，相比现有方法能够诱导出更接近于阿尔茨海默病的非人灵长类动物病理表征。

技术领域

本发明涉及非人灵长类实验动物AD疾病造模技术领域，具体涉及Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)，是一种渐进性发展、与衰老相关的神经退行性疾病。由于年龄、遗传和代谢等各种生物变化及环境的影响，人类极易罹患AD，且很难在其他物种中复制。由于目前AD病因不明且发病机制复杂，导致缺乏早期诊断方法和有效治疗手段，并且长期照顾AD患者需消耗大量人力、财力和专业设施，也给患者、家庭和社会带来了极大的精神和经济负担。自2003年以来，除2021年6月FDA加速审批了一个颇具争议又缺乏有效性证据的单抗药物Aducanumab外，基本没有用于治疗AD的新药获批，亦没有缓解AD疾病疗法的获批。这主要是因为AD发病机制、新药研发和早期诊断等研究均需要建立在“拟临床”动物模型上，但到目前为止，在动物整体水平内仍缺乏可以真实模拟AD病程发展、临床表征和病理特征的动物模型。因此，动物模型研究的滞后是AD机制研究及其新药研发转化效率低下的瓶颈。虽然此前以啮齿类动物(小鼠和大鼠)为模型对AD相关研究做出了一些贡献，但最终将其研究成果应用于临床转化试验时几乎均以失败告终。因此，目前得出的结论是：以家族性AD小鼠模型作为临床前药物转化和评价的研究结果无法直接应用于人类临床试验。由此可见，更高进化程度的大脑对于表现出AD的全谱特征是至关重要的。

目前的研究表明，非人灵长类(Nonhuman Primate,NHP)是构建AD模型最理想的动物来源。虽然当前对非人灵长类的AD模型也有一些研究，比如目前公开有单独使用Aβ寡聚物(AβOligomers,AβO)诱导AD模型的方法，但采用上述方法目前为止尚未在非人灵长类中发现较为完整的AD临床病理。

发明内容

本发明针对上述技术问题提供一种能够获得更接近阿尔茨海默病病理表征的Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

Aβ42-hIAPP共寡聚化物诱导的AD非人灵长类动物模型方法，使用Aβ42-hIAPP共寡聚化物注射到非人灵长类动物的双侧脑实质内诱导阿尔茨海默病模型。

优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物由可溶性β-淀粉样蛋白42寡聚体与人胰岛淀粉样蛋白多肽合成。

优选的，所述双侧脑实质为所述双侧脑实质的白质区域。

优选的，所述双侧脑实质的白质区域包括基底节、海马、颞叶之间的双侧海马上方的皮层下脑实质内。

优选的，包括注射方法，所述注射方法是先对非人灵长类动物进行头MRI定位相扫描，之后确定注射位点后，用立体定向手术方法进行脑内注射Aβ42-hIAPP共寡聚化物。

优选的，所述Aβ42-hIAPP共寡聚化物的合成方法如下：

(1)Aβ42以及hIAPP冻干肽分别溶于100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇中，浓度1mM，室温孵育1h后，将含hIAPP肽溶液于温和的氮气流下蒸发1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇得到干燥hIAPP肽膜；

(2)Aβ42与hIAPP肽膜分别在二甲亚砜中重悬，然后在浓度10mM HEPES缓冲液中进一步稀释，最终浓度为皆为110μM；

(3)快速取两体系1：1混匀，4℃共同孵育24h即得Aβ42-hIAPP共寡聚化物。