[发明专利]一种春兰MIR156b基因在调控植物开花时间中的应用

说明书

本发明公开了一种春兰MIR156b基因及其在调控植物开花时间中的应用，该基因为春兰miR156的一个前体基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其成熟体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明从春兰栽培品种“宋梅”中克隆获得MIR156b的基因序列，并在春兰中进行组织表达差异分析，将其构建至过表达载体导入目的植物中验证其功能，发现过表达MIR156b基因的拟南芥植株与野生型植株相比出现开花延迟、果实短小、叶片幼嫩等表型，即植物整体向幼年形态转化，可见该基因在兰花及其它园艺植物的栽培和性状改良中将发挥广泛的用途。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种春兰MIR156b基因在调控植物开花时间中的应用。

背景技术

兰科（Orchidaceae）是开花植物中最大科之一，全世界有25000多种，约占所有开花植物的10%。春兰（Cymbidium goeringii）属于兰科兰属中的小花型地生兰种类，其花型奇特、花色淡雅，花香清幽，叶姿优美，观赏价值和经济价值极高，是典型的叶艺、花艺两全兰花。但是，春兰的开花时间集中于初春季节，花期单一，且花芽分化率低、育种周期长，难以满足市场需求。因此，研究调控植物发育周期及相关性状特征基因的分子机制对春兰及其他植物的育种、生产及应用具有重要意义。

MicroRNA156是一类由约21个核苷酸组成的小RNA，其前体序列为多个MIR156基因，能够通过抑制其靶标转录因子SPL进行调控。目前已在多种植物中研究了miR156在植物生长发育中的作用，主要发现其能够调控植物生长周期转变，特别是从幼年期到成年期的转变及成花诱导方面起着主要的调控作用。目前，在兰科植物中尚未发现有关miR156及其前体基因在植物中进行功能验证的报道。因此，利用基因工程技术将从春兰中克隆获得的一个miR156前体基因——MIR156b转入模式植物中，对研究其在发育周期调控，尤其是开花时间调控中的功能具有重要意义，同时极具应用前景。

发明内容

针对现有育种技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种春兰MIR156b基因。本发明的另一目的是提供春兰MIR156b基因在植物育种中的应用，尤其是在开花时间调控方面。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种春兰MIR156b基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的春兰MIR156b前体基因中包含的成熟体序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的春兰MIR156b基因在调控植物开花时间及部分器官形态中的应用。

优选的，所述植物为春兰‘宋梅’。

具体方法为：将所述春兰MIR156b前体基因连接到载体上，通过农杆菌介导转化到野生型拟南芥“哥伦比亚”，筛选，培养，获得转基因植株。

有益效果：与现有技术相比，本发明通过对春兰MIR156b基因的克隆与鉴定，基因的表达分析，及遗传转化，验证其功能，发现过表达MIR156b基因的拟南芥与野生型相比，开花时间推迟，莲座叶数目增加，果实短粗，基生叶与茎生叶均小而幼嫩，可见该基因在兰花花期调控、器官形态建成及其他植物生产、育种中将发挥特定用途。

附图说明

图1 是春兰MIR156b基因克隆的菌检电泳图，其中，M为2000 bp DNA Marker，目的条带长度为200bp左右（目的基因91bp+载体同源臂）；

图2 是MIR156b在春兰花发育不同时期的表达情况，花芽3-5cm时表达量最高；

图3 是春兰MIR156b基因构建的过表达载体结构示意图；