[发明专利]一种LILRB1单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体公开一种白细胞免疫球蛋白样受体B1单克隆抗体及其应用。本发明以大肠杆菌表达的人源LILRB1蛋白胞外段作为抗原获得一种LILRB1单克隆抗体，能特异性识别细胞表面LILRB1受体，从而阻断LILRB1与其配体——人白细胞抗原‑G的结合。本发明所公开的LILRB1单克隆抗体可以有效逆转自然杀伤细胞(NK)的免疫耗竭状态，提升NK细胞对于靶细胞的杀伤功能，促进结核分枝杆菌的清除，因而具有临床治疗或预防结核病的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其应用，属于生物医药领域。

背景技术

结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis，Mtb）引起的传染性疾病。在过去的两千年中，TB累计造成超10亿人死亡；近年来全球每年仍有约150万人死于TB。2014年，世界卫生组织和联合国提出“2035年终止TB流行”的目标。然而，以目前的TB防控手段与技术尚难达成这一宏伟愿景，其中一项重要原因是现有的TB治疗药物已难以满足当下的临床需求。已问世近70年的异烟肼和利福平等仍被广泛使用但耐药严重，且由于TB治疗周期长等原因导致其出现难以避免的毒副作用。此外，TB与人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）的双重感染进一步加大了临床TB治疗的难度。目前，全球TB新药研发滞缓，且抗生素类药物都很快会面临耐药的威胁。因此，我们迫切需要研发新的抗结核药物或开发新的抗结核策略应对当前严峻的TB（尤其是耐药TB）流行形势。近年，新型宿主免疫调节剂是未来结核病新药开发的重要方向，其理念是：消除病原导致的免疫逃逸和免疫耗竭，提升宿主保护性免疫反应，并减少过度炎症反应导致的组织损伤，该类药物与传统TB药物联用还可缩短疗程并缓解耐药发生。

自然杀伤（natural killer，NK）细胞是固有免疫中的重要效应细胞，它不需要抗原刺激预先致敏便可以直接杀伤病原体感染的细胞，且对自体组织细胞无任何细胞毒性。我们发现，结核病患者NK细胞表面的一种抑制性受体——白细胞免疫球蛋白样受体B1（Leukocyte Immunoglobulin Like Receptor B1，LILRB1）同健康对照人群及结核潜伏感染人群相比特异性高表达，是引起TB患者体内NK细胞免疫功能耗竭的关键原因，其导致Mtb在患者体内难以被免疫细胞清除。我们进一步发现，利用LILRB1的特异性单克隆抗体以阻断LILRB1与其配体——人白细胞抗原-G（HLA class I histocompatibility antigen,alpha chain G，HLA-G）的相互作用可有效缓解TB患者NK细胞耗竭，从而提升其对感染病原菌的免疫细胞的杀伤活性。该类抗体具有潜在的结核病防治作用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明首先以大肠杆菌表达的人源LILRB1蛋白胞外段（氨基酸24-461位）作为抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，获得一种能分泌LILRB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。此杂交瘤细胞株分泌的LILRB1单克隆抗体能特异性识别细胞表面LILRB1受体，从而阻断LILRB1与配体HLA-G的结合。

其中SEQ ID NO：1的具体序列如下：