[发明专利]一种多重荧光定量PCR法检测水产病原的阳性内标及其应用

权利要求书

1.一种多重荧光定量PCR法检测水产病原的阳性内标，其特征在于，包含上游引物、下游引物和荧光探针；所述荧光探针的5’端采用荧光基团修饰，所修饰的荧光基团为HEX，3’端采用淬灭基团修饰，所述淬灭基团为BHQ1；

所述阳性内标的核酸序列为：

上游引物：5’-CGCAATTGGAATGAGTACACTT-3’；

下游引物：5’-TATACGCTAGTGGAGCTGGAAT-3’；

荧光探针：5’-ACTTGCCCTCCACTCGATCCTCGTACAA-3’；

或

上游引物：5’-ACGGGGAGGTAGTGACGAAA-3’；

下游引物：5’-ACTCGATCCTCGTACAAGGATT-3’；

荧光探针：5’-ACTCATTCCAATTGCGAGGCCCCGTTCG-3’；

或

上游引物：5’-TACAATGGCTATCACGGGTAA-3’；

下游引物：5’-CGCCTGCTGCCTTCCTTA-3’；

荧光探针：5’-TTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAAT-3’。

2.权利要求1所述多重荧光定量PCR法检测水产病原的阳性内标在制备水产病原检测试剂中的应用。

3.一种用于检测水产病原的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的阳性内标。

4.一种检测对虾肝肠胞虫的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的阳性内标和对虾肝肠胞虫引物组。

5.根据权利要求4所述的用于检测对虾肝肠胞虫的试剂盒，其特征在于，所述对虾肝肠胞虫引物组的核酸序列如下：

上游引物：5’-TGCAGAGTGTTGTTAAGGGTTTAA-3’；

下游引物：5’-GCTGTGTCTGTGTAAATATCGTCTC-3’；

荧光探针：5’-TACGAGTTTGGCGGCACAATTCTCAAACAT-3’；

所述荧光探针的5’端采用荧光基团修饰，所修饰的荧光基团为FAM，3’端采用淬灭基团修饰，所述淬灭基团为BHQ1。

6.一种检测对虹彩病毒的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的阳性内标和对虾虹彩病毒引物组。

7.根据权利要求4所述的用于检测对虾虹彩病毒的试剂盒，其特征在于，所述对虾虹彩病毒引物组的核酸序列如下：

上游引物：5’-AATGCTGACGAAATCATCAGTT-3’；

下游引物：5’-TCCTTTCCTCGTTGGAACAA-3’；

荧光探针：5’-TACGAATCGTTTCCCGTGAGACCCTTTAACG-3’；

所述荧光探针的5’端采用荧光基团修饰，所修饰的荧光基团为FAM，3’端采用淬灭基团修饰，所述淬灭基团为BHQ1。