[发明专利]一种ABO基因767位碱基替换诱导的剪接变体及应用在审

申请号：	202211708993.9	申请日：	2022-12-29
公开（公告）号：	CN116334110A	公开（公告）日：	2023-06-27
发明（设计）人：	金银戈;韩东旭;周小青;郑伟;席嘉慧;宁丽;鹿璇;高月;李双鹏;吴曼虹;唐成程;邹庆剑;陈敏;江晓汕;赖良学	申请（专利权）人：	五邑大学
主分类号：	C12N15/54	分类号：	C12N15/54;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/11;C12Q1/6876
代理公司：	广州三环专利商标代理有限公司 44202	代理人：	周全英
地址：	529000***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种 abo 基因 767 碱基替换诱导剪接变体应用
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【权利要求书】：

1.一种ABO基因767位碱基替换诱导的剪接变体，所述767位碱基替换为ABO基因第7外显子的C.767tC取代，其特征在于，所述剪接变体的第4外显子有29bp插入或第6外显子有3bp缺失。

2.根据权利要求1所述的剪接变体，其特征在于，所述插入为：由CATGGCTGTTAGGGAACCTGACCATCTGCAGCGCGTCTCGTTGCCAAG突变为CAGCTGGAGTGATCTTTCCAGAACATAAGCATGGCTGTTAGGGAACCTGACC ATCTGCAGCGCGTCTCGTTGCCAAG。

3.根据权利要求1所述的剪接变体，其特征在于，所述缺失为：第6外显子起始位置的TAG碱基缺失。

4.权利要求1所述的剪接变体的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用ABE编辑系统和sgRNA对ABO基因767位碱基进行T突变C，筛选克隆得到ABO基因c.767TC的突变细胞；

(2)分析所述突变细胞全基因组测序数据中indel和SNP的数量和/或频率；分析所述突变细胞转录组测序数据中的差异表达基因；

(3)提取所述突变细胞的RNA，反转录得cDNA；

(4)分析cDNA的ABO基因的剪接位点，即得剪接变体。

5.根据权利要求4所述的剪接变体的诱导方法，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列为gtcccaggcctacatcccca。

6.根据权利要求4所述的剪接变体的诱导方法，其特征在于，在步骤(4)中，对所述cDNA进行PCR扩增和TA克隆连接。

7.根据权利要求6所述的剪接变体的诱导方法，其特征在于，所述PCR的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

8.一种血型鉴定的试剂盒，其特征在于，包括检测引物对，所述检测引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

9.权利要求1～3任一项权利要求所述的剪接变体、权利要求4～8任一项所述的诱导方法在血型鉴定中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述血型鉴定为ABO*Ael05/B101亚型表型鉴定。