[发明专利]包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用

说明书

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用。所述包虫病检测引物包括上游引物Hy‑F和下游引物Hy‑R；所述上游引物Hy‑F和下游引物Hy‑R是根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫和少节棘球绦虫的rrnS基因序列设计得到。将所述检测引物应用于包虫病的荧光定量PCR检测，能够灵敏地检测包虫病，且准确性、特异性和敏感性高，稳定性好，检测结果快速、有效。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种包虫病检测引物、探针、试剂盒及应用。

背景技术

包虫病(Hydatidosis)又称棘球蚴病(Echinococcosis)。该病不仅是传播最广泛的寄生虫病之一，也是公共卫生方面治疗和预防费用最高的疾病之一，呈地方性流行，是由棘球属的绦虫的幼虫寄生于人或动物机体组织所引发的传染病。包虫病的早期临床表现无自觉症状，全身健康状况良好，病程进展缓慢，潜伏期1-30年。在分类学上可以分为四个虫种:细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，Eg)、多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis，Em)、伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli，Ev)和少节棘球绦虫(Echinococcus oligarthrus，Eo)。这四种棘球属绦虫可引起不同类型的包虫病。包虫病有“虫癌”之称。该病直接导致器官或屠体死亡，间接影响人和动物的健康。采取早期诊断、早期治疗以及积极防治动物传染源的综合性防治措施，对控制包虫病对人类健康和畜牧业发展的影响十分重要。

包虫病的诊断目前主要依靠于B超、影像学检查和病理学检查等。因方法自身限制，易造成小病灶、非典型病灶的误诊和漏诊。因此，有必要建立一种快速、灵敏、准确度高的包虫检测方法。随着分子生物学技术的发展，近年来出现了一系列检测包虫病的新方法，如多重PCR检测法、粪抗原ELISA法、粪DNA检测方法等。目前这些检测方法，均是针对细粒棘球绦虫或者多房棘球绦虫单独设计的引物和探针，增加了检测成本；多重PCR因其在一个反应体系中加入了二对以上的引物，容易与亲缘关系较近的病原发生交叉反应，并且引物对之间也易发生互补结合、易产生干扰反应现象，因此，存在特异性差问题。ELISA方法相对简便、快速，但对于微量或杂质较多的样品，其特异性和灵敏度较低。

目前在包虫病检测方面已开发了多种PCR检测方法，Trachsel,D.等开发了一种多重PCR来区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫和带绦虫的感染；Shang等开发了多重PCR检测方法，用于3种棘球绦虫的特异性和敏感性检测。目前尚未发现能在一个反应管条件下，同时针对细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫和少节棘球绦虫四个致病虫种，进行有效检测的技术方案。

发明内容

有鉴于背景技术中存在的技术问题，本发明的一个目的在于提供一种能同时用于检测和鉴定4种包虫病病原的产品，能够快速、有效地进行检测，准确性、特异性和敏感性高，稳定性好。

为了实现上述目的，本发明提供了一种包虫病检测引物，包括上游引物Hy-F和下游引物Hy-R；

所述上游引物Hy-F的核苷酸序列包括SEQ ID No.1，或，SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列；

所述下游引物Hy-R的核苷酸序列包括SEQ ID No.2，或，SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。

本发明还提供了与所述引物配套使用的探针，包括探针Hy-P；所述探针Hy-P的核苷酸序列包括SEQ ID No.3，或，SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列经过一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入获得的具有相同功能的编码核苷酸序列；或，在严格条件下可以与SEQIDNO.3所示的核苷酸序列进行杂交的核苷酸序列。