[发明专利]一种RT-PCR预混液

说明书

本发明涉及一种RT‑PCR预混液。具体地，所述RT‑PCR预混液同时包含反转录酶和DNA聚合酶，且所述PCR预混液具有保存时间长、灵敏度优异且特异性强的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种RT-PCR预混液。

背景技术

随着PCR技术的快速发展，市场上出现了各种体外诊断用的PCR试剂盒。为了方便操作，可以将Taq酶加入PCR试剂中，组成PCR预混液。PCR预混液通常包括dNTP、Taq酶和缓冲液等必要成分。现有的PCR预混液在常温下仅能在5-6小时内进行有效扩增，超过6小时的常温放置之后，灵敏度、特异性等性能会变得很差。

反转录PCR(RT-PCR)以RNA为模板进行扩增，在基因表达水平的检测、RNA病毒含量检测以及直接克隆特定基因cDNA等方面有着广泛的应用。反转录PCR分为两个步骤，首先在反转录酶的作用下将RNA反转录为单链的cDNA，然后在DNA聚合酶的作用下将单链cDNA扩增为双链的DNA分子。当反转录酶和DNA聚合酶在一管中进行反应时会相互干扰，引起RT-PCR灵敏度的降低。

一些RT-PCR试剂往往会添加BSA、明胶、甘油、多聚糖等添加剂可以提高反应体系的稳定性，例如专利CN114480589A公开了一种PCR反应体系稳定剂及其应用，通过添加蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜制备的PCR预混液可以使其在室温条件下存放至少6个月，然而该专利提到的PCR反应体系只含有DNA聚合酶，不包含逆转录酶，逆转录酶对温度等条件较为敏感，这些物质的添加不一定能保证逆转录酶也能在室温下稳定存放。

因此，希望有一种RT-PCR预混试剂，可以室温或者更高温度下稳定放置更长的时间，既能够延长试剂的存储，操作更加方便，又能减少因试剂在-20℃和常温下频繁转换，反复冻融带来的性能损失。

发明内容

本发明的目的在于提供一种保存时间长、灵敏度优异且特异性强的RT-PCR预混液。

本发明的第一方面，提供了一种RT-PCR预混液，包含如下组分：

其中，重量比按所述预混液的总重量计。

在另一优选例中，所述反转录酶为MMLV逆转录酶。

在另一优选例中，所述DNA聚合酶为热启动Taq DNA聚合酶。

在另一优选例中，所述RT-PCR预混液的pH为7.5-10。

在另一优选例中，所述RT-PCR预混液的pH为8.1-9.2。

在另一优选例中，包含如下组分：

其中，重量比按所述预混液的总重量计。

在另一优选例中，包含如下组分：

其中，重量比按所述预混液的总重量计。

在另一优选例中，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-8000。

在另一优选例中，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-1000。

本发明的第二方面，提供了一种本发明第一方面所述RT-PCR预混液的用途，用于制备核酸检测试剂盒。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为本发明实施例1中试剂组合1-8，在2-8℃保存12个月扩增结果。