[发明专利]一种定量分析中心碳代谢中间体的方法在审
| 申请号： | 202211719753.9 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN115950986A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 冯钰锜;李莎 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/04;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 江慧 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定量分析 中心 代谢 中间体 方法 | ||
1.一种定量分析中心碳代谢中间体的方法，其特征在于，所述方法包括：
将轻标的2-DMBA分别与所述不同浓度的中心碳代谢中间体混合标准品进行反应，获得多个具有不同浓度标准品的分析物；同时，将重标的d5-2-DMBA与中心碳代谢中间体混合标准品进行反应，获得中间体的衍生物，作为内标；
将多个所述具有不同浓度标准品的分析物以及所述内标均进行液相色谱-质谱，获得不同色谱峰并通过拟合获得线性回归方程；
将轻标的2-DMBA与待分析的样品进行反应，反应后进行液相色谱-质谱，同时加入内标进行液相色谱-质谱，获得2-DMBA标记目标检测物的峰面积和d5-2-DMBA标记内标的峰面积的比值；
将所述比值代入所述线性回归方程中，即可算出样品中目标检测物的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱中，色谱分离条件为：液相分离用的色谱柱是BEH C18(2.1×100mm,1.7μm,Waters.)。柱温为50℃，流速为0.3mL/min。流动相A和B分别是2mM碳酸氢铵溶液和乙腈。流动相梯度是：0-2分钟，5％B，2-17.5分钟，5％-25％B，17.5-21分钟，25％-90％B，21-24分钟，90％B，24-25分钟，90％-5％，25-30分钟，5％B。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将轻标的2-DMBA分别与所述不同浓度的中心碳代谢中间体混合标准品进行反应，获得多个具有不同浓度标准品的分析物，包括：
将中心碳代谢中间体混合标准品配制成不同浓度的溶液，包括浓度为0,0.01,0.025,0.05,0.1,0.25,0.5,1,2.5,5,10,25,50,100,250,500ng/mL，后使用2-DMBA标记，获得多个具有不同浓度标准品的分析物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将重标的d5-2-DMBA与1ng/mL中心碳代谢中间体混合标准品进行反应，获得中间体的衍生物，作为内标。
5.重氮试剂-DMBA/d5-2-DMBA在定量分析中心碳代谢中间体中的应用。
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