[发明专利]一种结合SARS-CoV-2 RBD的鲨鱼源单域抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种结合SARS-CoV-2RBD的鲨鱼源单域抗体，其特征在于，所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示。

2.一种编码如权利要求1所述的鲨鱼源单域抗体的核苷酸，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示。

3.一种如权利要求1所述的结合SARS-CoV-2RBD的鲨鱼源单域抗体的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1、以条纹斑竹鲨作为免疫对象，采用SARS-CoV-2RBD的重组蛋白为抗原进行免疫；在完成多次免疫后，提取免疫鲨鱼外周血淋巴细胞的总RNA，逆转录为cDNA，以cDNA为模板，扩增vNAR基因片段；

S2、将纯化后的vNAR基因片段插入噬菌粒载体pComb3XSS，构建重组噬菌粒载体，将重组噬菌粒载体转化E coli TG-1细胞，扩大培养后，通过辅助噬菌体VCS-M13感染，获得噬菌体抗体库；

S3、对噬菌体抗体库进行淘筛，获得阳性克隆，分别命名为S-RBD-55和S-RBD-61，并对其基因序列进行测序分析；

S4：扩增S-RBD-55和S-RBD-61所含vNAR基因片段，将其克隆入表达载体PET30a，构建重组表达载体，将重组表达载体转化E coli Shuffle T7细胞，筛选出阳性菌株后，扩大培养后加入诱导剂诱导表达，收集纯化抗体蛋白，即SARS-CoV-2RBD的单域抗体。

4.一种如权利要求1所述的结合SARS-CoV-2RBD的鲨鱼源单域抗体在制备预防、治疗和/或诊断SARS-CoV-2感染的试剂盒或药物中的用途。

5.一种如权利要求1所述的结合SARS-CoV-2RBD的鲨鱼源单域抗体在制备预防SARS-CoV-2感染的喷雾中的应用。

6.一种预防SARS-CoV-2感染的喷雾，其特征在于，包括以下质量百分比的成分：

鲨鱼源单域抗体S-RBD-55或S-RBD-61 0.5～1wt％；

抗菌剂8～10wt％；

花香精油0.5～1wt％；

三乙醇胺0.5～0.8wt％；

稳定剂3～5wt％；

分散剂3～5wt％；

无菌水补足至100wt％。

7.如权利要求6所述的一种预防SARS-CoV-2感染的喷雾，其特征在于，所述抗菌剂为乙醇或银离子抑菌剂；所述稳定剂多聚磷酸钠、过碳酸钠或亚硫酸钠；所述分散剂为十二烷基苯磺酸钠。