[发明专利]一种宛氏拟青霉代谢产物制备的种子萌芽剂

权利要求书

1.一种宛氏拟青霉代谢产物制备的种子萌芽剂，其特征在于，制备步骤如下：

步骤(1)宛氏拟青霉菌种经活化、接种、培养制备种子液：^①菌种涂布PDA固体培养基后，经27～32℃恒温培养20～24h活化复壮；^②挑取复壮单菌株划线接种到LB斜面培养基，于4℃下培养保存；^③挑取LB斜面培养基菌种接种到沙氏液体培养基，于250mL三角摇瓶中，经160～200rpm、30～37℃振荡培养20～24h形成宛氏拟青霉发酵种子液。

步骤(2)宛氏拟青霉种子液经三级发酵罐系统放大发酵，制备宛氏拟青霉发酵液：^①将宛氏拟青霉发酵种子液以8％～15％(v/v)接种比接种于10L发酵罐，罐内为灭菌后的沙氏液体培养基；^②经100～150rpm、32～37℃、pH6.8～8.9、溶氧6％～14％固定条件下发酵20～28h后，以8％～15％(v/v)接种比接种于100L发酵罐，罐内为灭菌后的沙氏液体培养基；^③经80～120rpm、30～35℃、pH6.8～8.9、溶氧6％～14％固定条件下发酵20～28h后，以8％～15％(v/v)接种比接种于1000L发酵罐，罐内为灭菌后的沙氏液体培养基；^④经60～100rpm、28～32℃、pH6.8～8.9、溶氧6％～14％固定条件下发酵48h后，继续经50～90rpm、28～32℃、pH7.2～9.2、溶氧6％～10％固定条件下发酵48～72h得到宛氏拟青霉发酵液。

步骤3)宛氏拟青霉发酵液经孔径为2～10μm滤膜抽滤，所得滤液为宛氏拟青霉代谢产物，进一步经浓缩压力为-0.1MPa、温度为60～75℃、浓缩量为原液体积3/4的真空减压浓缩得到宛氏拟青霉代谢产物浓缩液；

步骤(4)按重量取宛氏拟青霉代谢产物浓缩液0.2～0.5份、5-氨基乙酰丙酸0.05～0.2份、无水乙醇1～5份、二甲基亚砜0.5～2份、无菌水500份，混匀得到种子萌芽剂。

2.根据权利要求1所述的一种宛氏拟青霉代谢产物制备种子萌芽剂，其特征在于，步骤(1)所述宛氏拟青霉，购买自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC No.3.11554)。

3.根据权利要求1所述的一种宛氏拟青霉代谢产物制备种子萌芽剂，其特征在于，步骤(1)、(2)所述涂布、划线、接种，均在无菌环境下操作完成。

4.根据权利要求1所述的一种宛氏拟青霉代谢产物制备种子萌芽剂，其特征在于，步骤(3)所述混匀，其特定顺序为：①将宛氏拟青霉代谢产物浓缩液与无水乙醇混匀；②将5-氨基乙酰丙酸与二甲基亚砜混匀；③将两种混合物与无菌水充分混匀。

5.一种如权利要求1-3任一项所述的宛氏拟青霉代谢产物浓缩液制备方法在制备种子萌发剂中的应用。

6.一种如权利要求1-4任一项所述的种子萌芽剂在促进种子萌发中的应用。