[发明专利]一种免疫荧光层析动力学检测方法及系统

说明书

本发明公开了一种免疫荧光层析动力学检测方法，过程为:将待测样品加到测试卡的样品垫上并开始计时，同时荧光检测装置按照设定时间间隔，连续测量观测区C线和T线的荧光强度值C和T，并计算T/C比值，建立T/C值与时间关系曲线；根据该关系曲线，计算T/C值的一阶导数，以该一阶导数的峰值区间段作为线性反应段，取该线性反应段的一阶导数值为待测样品反应速率指数；预先以同样的方法对不同浓度标准品进行测试，建立标准品反应速率指数k与目标分子浓度c关系标准曲线；根据该标准曲线计算待测样品中目标分子浓度。本发明的速率法较现在临床使用的终点法更为准确、快捷，避免HOOK效应，排除了检测计时不准的影响，受测试卡批次、检测温度的影响较小。

技术领域

本发明属于生物医学体外检测技术领域，具体涉及一种免疫荧光层析动力学检测方法及系统。

背景技术

荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应以及荧光标记技术的膜检测技术。抗原－抗体反应可分为两个阶段，第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反应很快，几秒钟至几分钟即可完成，但无可见反应；第二阶段为抗原与抗体反应的可见阶段，出现凝集、沉淀、补体结合等反应，这一阶段的反应比较慢，需要几分钟至几十分钟。荧光免疫层析技术以固定有检测线和质控线的条状纤维层析材料为固定相，测试液即液态样品为流动相，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。层析条的一端到另一端依次设置样品垫、结合垫、检测线和质控线。检测线区域包被抗体或包被抗原，质控线区域包被抗抗体，荧光标记抗体或抗原装载于结合垫。流动相移动时，样本中的被测分子首先与负载在结合垫上的荧光标记抗体或抗原结合并带动其流动，随后在检测线区域或质控线区域发生进一步免疫反应。反应完成后，使用荧光分析装置对测试卡进行分析。现有免疫荧光层析检测方法都是采用终点法，在完成层析后的指定时间点对层析结果进行测试，这是因为目前免疫荧光层析测试装置都是采用机械扫描定时采集信号的方式检测荧光强度，只能在某一点进行测试。常用的免疫荧光免疫层析测试均测量的是免疫反应最适期的信号值，其基本过程为：加入样本后，反应确定的时间(一般为10-15分钟)时，扫描反应区域，得到T/C值，以浓度为横坐标，T/C为纵坐标计算出测试结果。

但由于免疫层析的方法学原因，现有方法存在如下问题：

一是可能出现假阴性。这是因为抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应，在抗原抗体比例相当或抗原稍过剩的情况下，反应最彻底，形成的免疫复合物沉淀最多、最大，而当抗原抗体比例超过此范围时，反应速度和沉淀物量都会迅速降低甚至不出现抗原抗体反应，抗原抗体反应曲线表现为倒扣的钩状曲线，称为HOOK效应。但实际测试时，由于被测试物中目标分子浓度未知，当样本中抗原量过大时，当10-15分钟时免疫反应进入后期，可能因为HOOK效应荧光强度下降，造成测试错误，导致假阴性结果。

二是生产工艺问题，产品批次存在差别，导致测试误差较大，变异系数(CV值)可达20％，这种测试目前只能用于POCT的定量、半定量检测，一般用于临床快速筛查。造成这种现象的主要原因有：测试条用的层析材料如硝酸纤维素膜(NC膜)本身具有不均匀性，被测试物如血清、血浆的粘度的变化，以及样品垫、结合垫的的生产工艺差别，都会影响到测试结果。样品流速不均一是CV值大的一个重要原因。

三是不准确定时。免疫反应过程实际上是一个变化的过程，在不同的时间段荧光强度不断变化，故产品说明书强调必须进行准确定时测试，对于自动化仪器可以克服这个问题，但对于手工测试要准确定时很难做到，不准确定时是造成CV值大的因素之一。

此外，采用机械扫描结构的仪器成本较高，测试速度慢，故障率也会增高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种免疫荧光层析动力学检测方法。

其技术方案如下：