[发明专利]无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种无血清超低蛋白的PK‑15细胞培养基及其制备方法，该PK‑15细胞培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基包括氨基酸、维生素、无机盐和辅助类成分；所述添加剂包括0.01‑0.5mg/L铁离子螯合剂和0.1‑2.5μmol/L小分子化合物CHIR99021。本发明的培养基具有无血清，无任何动物源成分，低蛋白和化学组分明确的特点，成本低适用于工业化的规模生产。

技术领域

本发明涉及PK-15细胞培养基技术和细胞工程领域，具体涉及一种无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基及其制备方法。

背景技术

血清是为细胞提供生长增殖所需的激素、生长因子等营养物质，但由于不同批次的血清之间存在批间差异，价格昂贵，存在容易被病毒和支原体感染的风险，含有大量成分复杂的蛋白质给细胞产品下游分离纯化带来很大的困难。猪源PK-15(Porcine kidney，猪肾上皮细胞)是贴壁培养细胞株，可以连续传代，是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的疫苗生产细胞系。目前已用于多种疫苗的生产。然而传统血清培养基中的很多动物源的成分不明确而且其可能携带的外源病毒会带来严重的安全隐患。近年来，商业化的无血清培养基也由最初血清替代物的研究发展到了化学界定培养基的研究。目前，无血清培养技术常用的培养基发展分类如下：

第一代，不含血清，添加替代血清的生物材料。特点是培养基的蛋白含量高，增加了纯化工作的难度和成本。

第二代，无动物来源培养基，添加基因工程和重组蛋白或植物蛋白水解物。不含动物源性蛋白衍生物，既可保证产品的安全，又能保障细胞生长，但是重组蛋白含量高价格昂贵，而且植物水解蛋白成分复杂，不利于下游蛋白纯化。

第三代，无蛋白培养基，培养基完全不含蛋白。优点在于利于纯化分离，培养基相对稳定，但应用局限。

第四代，化学界定培养基。培养基所含成分都是明确的，有利于细胞体外培养的代谢研究。无血清、无蛋白、无动物来源、成分明确的新型培养基是最理想、最安全的通用培养基，在细胞工程领域大规模生产病毒性疫苗、重组蛋白等制品方面应用广泛。

目前，在疫苗生产PK-15的贴壁培养中，还未见第四代化学界定培养基的使用。基于当前规模化生产疫苗使用，所以迫切需要一款价格低廉、无动物源、化学成分明确的用于贴壁工艺的PK-15细胞无血清高效培养基。

发明内容

针对上述问题，本发明的主要目的在于提供一种无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基及其制备方法，具有无血清，无动物白蛋白，无任何动物源成分，低蛋白和化学组分明确的特点，成本低廉，能支撑PK-15细胞无血清培养，适用于各种PK-15细胞培养方式包括培养瓶，细胞培养转瓶，生物发酵罐，可用于实验室研究和工业化的规模生产。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

作为本发明的第一个方面，提供一种无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基包括氨基酸、维生素、无机盐和辅助类成分；所述添加剂包括0.01-0.5mg/L铁离子螯合剂，0.1-2.5μmol/L小分子化合物CHIR99021。

作为本发明的第二个方面，提供一种如上所述的无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基的制备方法，包括：将基础培养基和添加剂溶解于水中，得到混合液；调节所述混合液的pH值和渗透压，使pH值在7.0～7.4范围内，渗透压在300～340mOsm/kg；将经调节后所得的混合液进行过滤，得到所述PK-15细胞培养基。

基于上述技术方案，本发明提供的无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基及其制备方法至少具有以下有益效果其中之一或其中一部分：