[发明专利]一种CHO细胞株、D-二聚体单克隆抗体及其应用

权利要求书

1.一种CHO细胞株，其特征在于，所述CHO细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202202，其稳定表达D-Dimer单克隆抗体。

2.权利要求1所述CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体，其特征在于，所述D-Dimer单克隆抗体A包括如SEQ ID NO:7所示的轻链氨基酸序列和如SEQ ID NO:9所示的重链氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用。

4.根据权利要求1所述的CHO细胞株的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：用完全弗氏佐剂和天然抗原对小鼠进行免疫，分离小鼠的脾脏细胞，使其在PEG融合剂作用下与SP2/0细胞融合，在HAT选择培养基上进行筛选，获得杂交瘤细胞；

步骤2：提取杂交瘤细胞系的RNA，RT-PCR扩增抗体轻链和重链可变区DNA的序列，对扩增后的DNA序列进行测序；

步骤3：将测序获得的轻链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgK保守区的DNA序列，测序获得的重链可变区DNA序列加上小鼠抗体IgG1保守区DNA序列；

步骤4：利用基因工程技术构建抗体轻链和重链表达载体；将载体转染进入CHO细胞系，获得稳定表达单克隆抗体的CHO细胞株。

5.据权利要求4所述的CHO细胞株的制备方法，其特征在于，步骤3中，轻链混合引物：

5’-ACAGT TGGTG CAGCA TCTGC-3’（IgK保守区5’端反向引物）

5’-GGCGA AGACT TGGGC TGGCC-3’（IgL1保守区5’端反向引物）

5’-GGAGT GGACT TGGGC TGACC-3’（IgL2保守区5’端反向引物）

重链混合引物：

5’-CTAGG GGGTG TCGTT TTAGC-3’ （IgG1 保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGCTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2a 保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGGTG TTGTT TTAGC-3’ （IgG2b 保守区5’端反向引物）

5’-GATGG GGCTG TTGTT GTAGC-3’ （IgG3 保守区5’端反向引物）。

6.据权利要求4所述的CHO细胞株的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，与骨髓瘤细胞的融合的脾脏细胞为末次免疫后第三天取脾制成的细胞悬，其骨髓瘤细胞的混合比例为1：6到1：10。

7.根据权利要求3所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒包括R1试剂和R2试剂，R2试剂中包含D-Dimer单克隆抗体乳胶、牛血清白蛋白和ProClin 300。

8.根据权利要求3所述的CHO细胞株分泌产生的D-Dimer单克隆抗体在免疫比浊体外诊断试剂盒中的应用，其特征在于：R1试剂包括3-双（2-羟乙基）氨基-2-羟基丙磺酸（DIPSO）缓冲液、氯化钠，、曲拉通X-100和ProClin 300。