[发明专利]增强协同作用的益生菌混合发酵方法

权利要求书

1.增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建第一重组质粒，所述重组质粒包含NC_009792.1基因序列；

构件第二重组质粒，所述重组质粒包含DD259296.1基因序列；

将第一重组质粒和第二重组质粒共同转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组细胞；

重组细胞、鼠李糖乳杆菌CGMCC No.14410)、嗜酸乳杆菌(CGMCCNo.4649)、嗜热乳杆菌(CGMCC No.0784)和副干酪乳杆菌杆菌(CCTCCNO:201217)共同接种于发酵培养基中；所述发酵培养基添加有葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味剂，添加无机盐；所述葡萄糖的加入量为重量g/体积ml比0.1～1.5％，蛋白胨的加入量为重量g/体积ml比0.05～1％，酵母膏的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.2％，酵母粉的加入量为重量g/体积ml比0.01～0.1％；所述的无机盐为K₂HPO₄·3H₂O 0.1g/100ml、KH₂PO₄0.1g/100ml、FeSO₄·7H₂O5.0mg/100ml、ZnSO₄·7H₂O 4.4mg/100ml、MgSO₄·7H₂O 25mg/100ml，每培养4h，观察发酵液的OD值变化。

2.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，所述重组质粒的载体选自pET-28a(+)。

3.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，所述大肠杆菌选自DH5α。

4.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，所述构建重组质粒包括对载体通过限制性内切酶进行双酶切，所述限制性内切酶选自BamHI和EcoRI。

5.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，得到第一扩增产物的所述PCR扩增的引物为：

上游引物：5’-GATTC GGGATCCCATGCTTTTCCCA-3’

下游引物：3’-AATTC TCGATGTAGTTCCCTTTGCGT-5’。

6.根据权利要求1所述的增强协同作用的益生菌混合发酵方法，其特征在于，得到第二扩增产物的所述PCR扩增的引物为：

上游引物：5’-GATTC GCAACGGGGTTATCAACTGC-3’下游引物：3’-AATTCGCGTGACATCCATCACTCCT-5’。