[发明专利]一种肿瘤组织冷热解离提取并制备细胞悬液的方法

权利要求书

1.一种肿瘤组织冷热解离提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：首先将肿瘤组织的样品取出，经过解离装置进行解析，使包含真皮层和表皮层的供体皮肤组织样品经受解离装置，解离装置包含在皮肤组织样品中的真皮与表皮连接处，解离真皮层和表皮层的酶；

步骤二：培养基分为两种培养基，分别为无血清培养基与完全培养基，配制细胞清洗液，配制胶原酶II解离原液，在无菌无RNA酶细胞培养皿中加入适量解离原液，离体组织剪碎成零点五毫米到一毫米的小块后，置于已含有适量解离原液的无菌无RNA酶细胞培养皿中，并用解离原液溶液冲洗一到两次，直至把血液、脂肪层等多余组织去除干净；

步骤三：将胶原酶II解离原液，加入至干净的一号试管内，并在管壁做好标记，用镊子将步骤二处理好的的组织小块夹入含有胶原酶II解离原液的一号试管内，消化孵育；

步骤四：再将经加入初步消化的组织及胶原酶II解离原液转移至二号试管内,并加入十五毫升步骤一中的无血清培养基，离心去上清液，重悬孵育，加入步骤一中五毫升无血清培养基，用移液枪轻轻吹打，直至组织完全裂解，肉眼观察不见明显团块，终止消化，加入等体积的步骤一中的完全培养基，轻轻吸打混匀，获得细胞悬液。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织冷热解离提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述步骤二中的细胞清洗液包括杜氏磷酸盐缓冲液与牛血清白蛋白，每一百毫升的杜氏磷酸盐缓冲液中加入零点零四克牛血清白蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织冷热解离提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述步骤二中的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及一些蛋白质和清蛋白，纤维蛋白，胎球蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织冷热解离提取并制备细胞悬液的方法，其特征在于：所述步骤二中的完全培养基包括蒸馏水、葡萄糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、七水硫酸镁。