[发明专利]一种呼吸道合胞病毒抗原蛋白的编码基因、抗原蛋白、重组载体、疫苗及应用

说明书

本发明提供了一种编码呼吸道合胞病毒融合前融合糖蛋白(preF)、核蛋白(nucleoprot ein，N)和转录延长/转录终止抑制因子(M2‑1)的核苷酸序列、重组载体、疫苗及应用，属于疫苗制备技术领域。本发明利用RSV主要中和抗原preF、和可拓宽抗原T细胞表位的RSV病毒内部保守蛋白N和M2‑1的共表达，构建获得表达该抗原组合的RSV腺病毒载体；所述重组载体能够用于制备呼吸道合胞病毒疫苗，经滴鼻免疫及攻毒感染小鼠后，该RSV腺病毒载体疫苗免疫动物后可同时诱导产生针对preF、N和M2‑1的高效、持久的呼吸道黏膜局部的体液免疫、记忆性细胞免疫和记忆性固有免疫应答。

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种呼吸道合胞病毒抗原蛋白的编码基因、抗原蛋白、重组载体、疫苗及应用。

背景技术

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus，RSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染最重要的病毒病原，几乎100％的婴幼儿在2岁以内感染过1次以上。在1月至1岁的儿童死亡原因中，RSV感染引起的死亡人数约占总数的6.7％，紧随疟疾，排列第二位。在小于5岁的儿童因下呼吸道感染引起死亡的原因中，RSV感染引起的死亡人数约占总数的6.29％，紧随肺炎球菌，位列第二位。RSV是引起儿童流行性喘憋性肺炎(简称流喘肺炎)及儿童期变应性哮喘的主要病原。老年人和存在免疫缺陷的病人也易遭受RSV引起的严重感染，且有感染史者易发生肺功能异常、支气管哮喘等肺部疾病。

虽然RSV重要性已被广泛认识，但是经过多年的努力，RSV的诊断、预防及治疗依然缺乏有效、可靠的方法。因此，研发可用于预防RSV感染的疫苗，必将有助于提高婴幼儿及老年人群的健康水平，实现良好的社会效益和经济效益。

RSV属于肺炎病毒科、正肺病毒属(Orthopneumovirus)，基因组为单股负链RNA，编码11种蛋白，其中融合糖蛋白(Fusion glycoprotein，F)和黏附糖蛋白(Attachmentglycoprotein，G)为主要中和抗原。根据G蛋白抗原性的差异，RSV分为A和B两个亚型，针对G蛋白保守区的中和抗体能够抑制A、B两个亚型的RSV感染，减低疾病严重程度。F蛋白具有多个中和抗原表位，且抗原性较稳定，针对F蛋白的中和抗体对A、B两个亚型的RSV感染具有交叉保护作用，因而成为RSV疫苗研制的主要目标抗原。天然状态下，F蛋白主要有两种构象状态：即亚稳态的融合前F(prefusion，preF)和稳定的融合后F(postfusion，postF)。在已鉴定的RSVF蛋白中和抗原表位中，siteI主要位于post-F上，siteII和IV在pre-F和post-F上均存在，siteIII主要位于pre-F，siteV和仅存在于pre-F。进一步研究表明，在感染者血清中的具有保护作用的主要中和抗体是针对siteIII、V和的抗体，与post-F相比，pre-F能够诱导机体产生更高的中和活性和更好的保护作用。因此，近年来，pre-F成为RSV疫苗研制的重点。研究发现针对F蛋白的单克隆中和抗体可降低高危人群RSV感染相关疾病严重程度，在RSV流行季节，这种单克隆抗体(Palivizumab，帕利珠单抗)已用于对高危人群的预防。因此，当前RSV疫苗设计的首要目标是产生足够高的中和抗体。

在成人RSV感染性实验中发现，上呼吸道分泌的黏膜中和抗体与保护作用的关联性较血清中和抗体更高，随后的研究显示，持久的RSV特异性黏膜IgA及黏膜IgG较血清中抗体具有更好的保护作用，在抑制病毒感染，减轻肺部炎症方面具有更好的作用。研究还发现，RSV自然感染产生的RSV特异性黏膜IgA记忆性B细胞存在缺陷、难以产生高水平及持续性的SIgA。同时，相较于RSV感染后血清优势中和抗体主要是针对RSVF，而黏膜优势中和抗体主要是针对RSVG、N和M2-1。

长期以来，预防性疫苗仅关注中和抗体，RSV中和抗体虽可减轻疾病严重程度，但尚难以有效预防RSV感染。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种呼吸道合胞病毒抗原蛋白的编码基因、抗原蛋白、重组载体、疫苗及应用。