[发明专利]维生素B12代谢相关基因的分型试剂盒、引物和分型方法

权利要求书

1.一种维生素B12代谢相关基因的分型试剂盒，其特征在于，所述分型试剂盒至少包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂；

所述核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.60所示的多重PCR扩增引物；

所述单碱基延伸反应试剂中含有如SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.101所示的单碱基延伸引物。

2.根据权利要求1所述的分型试剂盒，其特征在于，所述分型试剂盒中还包括碱性磷酸酶反应液和/或脱盐试剂；

所述碱性磷酸酶反应液中的碱性磷酸酶选自虾碱性磷酸酶、小牛肠碱性磷酸酶、大肠杆菌碱性磷酸酶、大鼠碱性磷酸酶中的至少一种；和/或

所述脱盐试剂选自脱盐树脂；和/或

所述核酸扩增试剂中还含有Agena酶系DNA聚合酶。

3.根据权利要求1所述的分型试剂盒，其特征在于，所述分型试剂盒中还包括阳性对照品、阴性对照品和杂合突变阳性对照品；

所述纯合突变阳性对照品为含有所有突变型位点的DNA片段的参考基因；

所述阴性对照品为含有所有野生型位点的DNA片段的参考基因；

所述杂合突变阳性对照品：所述纯合突变阳性对照品和所述阴性对照品的摩尔比为1：1的混合物。

4.根据权利要求1所述的分型试剂盒，其特征在于，

所述核酸扩增试剂包括M1管、M2管、M3管：

M1管中含有如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.16所示的PCR扩增引物，M2管中含有如SEQ IDNO.17～SEQ ID NO.44所示的PCR扩增引物；M3管中含有如SEQ ID NO.45～SEQ ID NO.60所示的PCR扩增引物；

在M1管中，如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9～SEQ IDNO.16所示引物的浓度均为0.5～10μmol/L；SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.8所示引物的浓度均为0.6～10μmol/L；

在M2管中，如SEQ ID NO.17～SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.21～SEQ IDNO.30、SEQ IDNO.33～SEQ ID NO.44所示引物的浓度均为0.5～10μmol/L；SEQ ID NO.19～SEQ IDNO.20、SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.32所示引物的浓度均为0.6～10μmol/L；

在M3管中，如SEQ ID NO.45～SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.53～SEQ IDNO.60所示引物的浓度均为0.5～10μmol/L；SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.52所示引物的浓度均为0.4～10μmol/L；

所述单碱基延伸反应试剂包括S1管、S2管、S3管：

S1管中含有如SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70所示的单碱基延伸增引物，S2管中含有如SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.86所示的单碱基延伸引物；S3管中含有如SEQ ID NO.90～SEQID NO.104所示的单碱基延伸引物；

在S1管中，SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.64、SEQ ID NO.66～SEQ IDNO.70所示引物的浓度均为5～15μmol/L，SEQ ID NO.65所示引物的浓度为10～20μmol/L；

在S2管中，SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.74～SEQ IDNO.78、SEQ IDNO.82～SEQ ID NO.86所示引物的浓度均为5～15μmol/L，SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.79～SEQ ID NO.81所示引物的浓度均为25～35μmol/L；

在S3管中，SEQ ID NO.87～SEQ ID NO.97、SEQ ID NO.99～SEQ IDNO.101所示引物的浓度均为5～15μmol/L，SEQ ID NO.99所示引物的浓度为15～25μmol/L。

5.根据权利要求1所述的分型试剂盒，其特征在于，

所述核酸扩增试剂还包含N管，N管中含有如SEQ ID NO.102、SEQ IDNO.103所示的参考引物。