[发明专利]荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法。本发明提供了氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：P1、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达产量；P2、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达效率；P3、制备猴痘病毒A29L抗原分泌蛋白制品。本发明采用信号肽引导猴痘病毒A29L真核细胞分泌表达，其中荧光素酶信号肽Ga引导猴痘病毒A29L抗原分泌表达水平显著优于白蛋白信号肽Al和抗体轻链信号肽Lc，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法。

背景技术

1958年发现一种痘病毒在实验猕猴身上导致一种类似人类天花的疾病，因此称为猴痘病毒。1970年首次在刚果一名9岁男孩身上发现猴痘病毒，症状为水疱或脓疱疹，传染性弱于天花。此后，猴痘病例不断在刚果、中非和西非等地区发现。2022年5月，新一轮的“猴痘”疫情最先在英国发现，已经遍及英国、葡萄牙、西班牙、澳大利亚、德国、法国等多个国家。目前，“猴痘”病毒疫情仍趋于蔓延态势，因此受到多个国家卫生监管部门的关注。

猴痘病毒基本的感染形态为成熟病毒粒子(mature virion，MV)，除此之外，还有一种形态：成熟病毒粒子外还包绕有一层来源于内质网膜的脂质膜(extracellularenveloped，EV)。其中，A29L抗原为猴痘病毒成熟病毒粒子的膜蛋白，也是重要的免疫靶点之一。因此，如何制备A29L蛋白成为猴痘病毒检测试剂或疫苗的关键产品研发的亟待解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的主要问题是如何制备猴痘病毒A29L抗原。

为了解决上述问题，本发明提供了一种荧光素酶信号肽(信号肽Ga，SEQ IDNo.1)，信号肽Ga可引导猴痘病毒A29L抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于白蛋白信号肽(信号肽Al)和抗体轻链信号肽(信号肽Lc)。

本发明首先提供了氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：

P1、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达产量中的应用；

P2、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达效率中的应用；

P3、制备猴痘病毒A29L抗原分泌蛋白制品中的应用；

所述相关生物材料为SEQ ID No.1所述多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。

在本发明的具体实施方式中，所述重组载体为将SEQ ID No.7所示DNA片段(SEQID No.5的第16-66位为信号肽Ga的编码基因，即SEQ ID No.2)插入到pCGS3载体的多克隆位点(如HindIII和PacI)后得到的重组质粒。

进一步地，所述宿主细胞可为真核宿主细胞，如：HEK293细胞，CHO细胞，酵母细胞和昆虫细胞等。

在本发明的具体实施方式中，所述宿主细胞具体为Expi293F细胞。

进一步地，所述编码基因可为如下任一：

(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；

(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。