[发明专利]一种植物基因组DNA提取试剂盒及其提取方法

说明书

本发明涉及核酸提取纯化技术领域分子生物学领域，主要涉及一种植物基因组DNA提取试剂盒及其提取方法。该试剂盒，包括裂解液、RNA酶、蛋白酶K、磁珠、除杂液A、除杂液B、磁珠结合液和洗脱液。本发明将SDS细胞裂解方法与磁珠提取核酸的方法进行了有机结合，使得操作步骤简单、耗时时间短；并在裂解液和除杂液A中加入了PVP试剂，减少了植物中的酚类、醌类、单宁类物质、多糖和色素的影响，提高了核酸产量和纯度并便于后续下游实验操作。

技术领域

本发明涉及核酸提取纯化技术领域分子生物学领域，主要涉及一种植物基因组DNA提取试剂盒及其提取方法。

背景技术

植物分子生物学研究是近些年来发展迅速的技术领域之一，植物基因组脱氧核糖核酸的提取是分子生物学实验的基础。随着植物分子生物学研究的发展，植物基因组提取也变的越来越重要(胡琼2022)。高通量植物基因组DNA抽提在基因组测序、分析突变体、转基因株系、质量鉴定、指纹图谱和目前最受欢迎的基因组编辑工具CRISPR-Cas9技术等研究中是必需的基础材料(ZHOU Z et al 2015，ZHANG Yet al 2016，WANG Y et al 2014)。

有关植物基因组测序、分析突变体、基因型鉴定和质量鉴定等研究需要大样本量基因组DNA的分子生物学实验，往往需要耗费大量时间和精力进行DNA提取(李琳2020)，除此之外，前期DNA制备的速度与质量无疑直接影响着分子实验的效率及准确率。传统的DNA提取方式，如十二烷基硫酸钠(SDS)法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法等都存在步骤繁琐、耗时过长和试剂有毒有害等问题，且在提取过程中还会产生大量废液，不能满足大批量实验和现代分子生物学发展的要求，除此之外使用十二烷基硫酸钠(SDS)法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法等方法提取的核酸样品会存在蛋白杂质污染，色素去除不完全等缺点。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明的目的是提供一种至少解决上述一种问题、可降低蛋白质污染及缩短提取时间的植物基因组DNA提取试剂盒及其提取方法。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种植物基因组DNA提取试剂盒，包括裂解液、RNA酶、蛋白酶K、磁珠、除杂液A、除杂液B、磁珠结合液和洗脱液；

所述裂解液包括聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠；

所述除杂液A包括乙酸钾、聚乙烯吡咯烷酮；

所述除杂液B包括Tris-Hcl、EDTA、盐酸胍、无水乙醇；

所述磁珠结合液为异丙醇。

在一些实施方案中，所述裂解液包括：2％～4％聚乙烯吡咯烷酮，1％～2％十二烷基硫酸钠(SDS)，pH为7～8。

在一些实施方案中，所述除杂液A包括3～5M乙酸钾、0.1％～1％聚乙烯吡咯烷酮，pH为5～6。

在一些实施方案中，所述除杂液B包括0.025～0.05M Tris-Hcl、0.005～0.01MEDTA、3～6M盐酸胍、50％无水乙醇，pH为5～6。

在一些实施方案中，所述磁珠为羟基磁珠，粒径为200～400nm。

在一些实施方案中，所述蛋白酶K的浓度为20mg/ml。

在一些实施方案中，所述洗脱液选自无酶水、Tris Buffer中的一种或多种。

在一些实施方案中，所述磁珠为瑞贝西的NB0107磁珠，粒径为200～400nm。

一种利用如上所述的植物基因组DNA提取试剂盒提取植物基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

破碎植物细胞后，用裂解液和蛋白酶K处理后，离心取上清液A；